¿Cuál es el método para determinar la aflatoxina B1 en el té mediante cromatografía líquida de alta resolución?

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Método para la determinación de aflatoxina B1 en té mediante cromatografía líquida de alta resolución

1 Ámbito de aplicación Este método es adecuado para pruebas de té exportado. del contenido de aflatoxina B1.

2. Resumen del principio: la muestra se extrae con cloroformo, el extracto se purifica mediante una columna de gel de sílice, el extracto purificado se derivatiza con ácido trifluoroacético y se mide con un cromatógrafo líquido de alto rendimiento equipado con un Detector de fluorescencia. Cuantificación mediante método estándar externo.

3. Reactivos e instrumentos principales 3.1. Reactivos principales: cloroformo; n-hexano; metanol: grado de espectro UV; ácido trifluoroacético; ; solución de cloruro de metilo y metanol de ácido trifluoroacético (95+5); solución de benceno-acetonitrilo (98+2); producto estándar de aflatoxina B1: pureza ≥99%; solución estándar de aflatoxina B1: pesar con precisión una cantidad adecuada de producto estándar de aflatoxina B1, y use benceno. Coloque la solución de acetonitrilo en un matraz aforado de color marrón para preparar una solución madre estándar con una concentración de 10 μg/mL. Si es necesario, prepare una solución de trabajo estándar de concentración adecuada. 3.2. Instrumento de cromatografía líquida de alto rendimiento, equipado con detector de fluorescencia; columna de gel de sílice Tianjin Heng'ao; oscilador Tianjin Heng'ao: serie HMS; Tianjin Heng'ao ultrasónico: serie HU, HS; 'ao Instrumento de soplado de nitrógeno; membrana de filtro Tianjin Heng'ao: para sistemas orgánicos, filtro de membrana microporosa Tianjin Heng'ao

tubo de microjeringa para centrífuga: 5 ml con tapón y boca esmerilada; ; molinillo.

4. Extracción y preparación de muestras 4.1. Método de muestreo Seleccione aleatoriamente el número de piezas especificadas en 2.2 de diferentes partes de todo el lote de pilas de productos y ábralas una por una. Vierta todas las hojas de té en láminas de plástico y utilice una pala de muestreo para sacar unos 500 g de muestras representativas de cada pieza. Mezcle bien la muestra tomada, utilice el método de cuarteo o un divisor de muestra para dividir gradualmente 500 g, colóquelo en un tubo de muestra limpio y sellado, séllelo, márquelo y envíelo al laboratorio a tiempo. 4.2 Preparación de las muestras: Triturar todas las muestras recuperadas, pasarlas por un tamiz de malla 20, mezclarlas uniformemente, dividirlas en dos muestras, colocarlas en un recipiente limpio, sellarlos y marcarlos. 4.3. Conservación de la muestra: Almacenar la muestra a temperatura ambiente. Nota: Durante las operaciones de muestreo y preparación de muestras, se debe evitar que las muestras se contaminen o se produzcan cambios en el contenido de residuos. Para obtener más información técnica relacionada con pruebas de calidad, pruebas analíticas, mediciones químicas y materiales de referencia, consulte el catálogo estándar del Instituto Nacional de Materiales Estándar y Control de Medicamentos, y para materiales de referencia de medicamentos, consulte /plist_3/plist_3_0_0_1. html

5. Breve descripción del proceso 5.1 Extracción: Pesar 5,0 g de la muestra (con una precisión de 0,1 g) en un matraz Erlenmeyer con tapón de 100 ml, agregar 15 ml de cloroformo y extraer en una coctelera durante 30 minutos. y luego filtrar a través de un embudo revestido con fibra de vidrio. Recoger el filtrado en un matraz de fondo redondo con un tubo de cola en un evaporador rotatorio, lavar el residuo del filtro con cloroformo y recoger el filtrado hasta aproximadamente 20 ml. 5.2 Purificación: Utilice un rotavapor para concentrar el filtrado anterior en un baño de agua a 50 °C hasta aproximadamente 1 ml, fíltrelo a través de una membrana filtrante de 0,45 μm y luego inyéctelo en una columna de gel de sílice. Lavar el matraz con 2 a 4 ml de n-hexano, enjuagar la columna y desechar el efluente. Luego use de 3 a 4 ml de solución de cloroformo y metanol para eluir a un caudal de 2 gotas por segundo y recoja el eluido en un tubo de centrífuga. Seque lentamente con un instrumento de nitrógeno para la derivatización. 5.3 Derivatización 5.3.1 Añadir 200 μL de n-hexano y 50 μL de ácido trifluoroacético a la muestra en el tubo de centrífuga mencionado anteriormente, cubrirlo herméticamente con el tapón esmerilado, oscilar ultrasónicamente durante 1 min, dejar reposar durante 10 min. y use un soplador de nitrógeno para secarlo lentamente. Diluir a 1,0 ml con solución de acetonitrilo-agua (1+1), sonicar durante 1 min, filtrar con una membrana de filtro de 0,5 μm y utilizar el filtrado para cromatografía líquida. 5.3.2 Solución de trabajo estándar: Tome 1,0 ml de solución de trabajo estándar, séquela lentamente con un soplador de nitrógeno y siga los pasos 5.3.1. 5.4 Determinación 5.4.1 Condiciones cromatográficas Columna cromatográfica: NOVA PAKc18, 300 mm x 3,9 mm (diámetro interior): solución de metanol-agua (42+58); detector de fluorescencia: longitud de onda de excitación; 375 nm, longitud de onda de emisión 425 nm; temperatura de la columna: temperatura ambiente. 5.4.2 Determinación Según el contenido de aflatoxina B1 en la solución de muestra, seleccione una solución de trabajo estándar con una altura de pico similar. Los valores de respuesta de los derivados de la aflatoxina B1 en la solución de trabajo estándar y la solución de muestra deben estar dentro del rango lineal de detección del instrumento.

Inyecte volúmenes iguales de la solución de trabajo estándar y la solución derivada de la solución de muestra para medir. En las condiciones cromatográficas anteriores, el tiempo de retención de los derivados de aflatoxina B1 es de aproximadamente 8 minutos. 5.4.3. La prueba en blanco se llevará a cabo de acuerdo con los pasos de medición anteriores, excepto que no se agregue ninguna muestra.

6. Utilizar un procesador de datos cromatográficos para el procesamiento de datos para el cálculo de resultados.

7 Determinación del límite inferior y tasa de recuperación 7.1. Límite inferior El límite inferior de determinación de este método es 0,001. mg/kg. 7.2 Tasa de recuperación Datos experimentales de la tasa de recuperación: La concentración de adición de aflatoxina B1 está en el rango de 0,001 ~ 0,5 mg/kg, y la tasa de recuperación es del 89,1% ~ 104,9%.