Me gustaría conocer el medio de cultivo y el proceso de producción del cultivo líquido de E. coli. Cuanto más detallado mejor, gracias.

10% (v/v) glicerol

0,125% (m/v) extracto de levadura

0,25% ( m/v) tripsina peptona

Utilice un filtro de 0,22 um para filtrar y esterilizar, dividir en porciones de 2,5 ml y almacenar a 4 °C.

Medio LB (Luria-Bertani)

A la hora de preparar cada litro de medio se deben añadir a 950 ml de agua desionizada los siguientes ingredientes:

Triptona 10 g

Extracto de levadura 5 g

Cloruro de sodio 10 g

Agitar el recipiente hasta disolver el soluto. Ajuste el pH a 7,0 con 5 mol/L de NaOH (aproximadamente 0,2 ml), ajuste el volumen a 1 L con agua desionizada y esterilice con vapor en un autoclave a 15 psi (1,05 kg/cm2) durante 20 minutos.

Medio M9

Para preparar 1 litro de medio, agregue los siguientes ingredientes a 750 ml de agua desionizada estéril (enfriada a 50 °C o menos):

Solución salina 5×M9 200 ml

1 mol/LMgSO4 2 ml

Solución de fuente de carbono apropiada al 20 % (como 20 % de glucosa) 20 ml

20 % de agua desionizada estéril (enfriada a 50 °C o menos), 20 ml

1 mol/LCaCl2 0,1 ml

Agua desionizada estéril hasta 980 ml.

Si es necesario, añadir aminoácidos y vitaminas apropiados al medio M9.

Preparación de solución salina 5×M9: Disolver las siguientes sales en agua no ionizada, el volumen final es 1L:

Na2HPO4-7H2O 64g

KHPO4 15g

NaCl 2,5g

NH4Cl 5,0g

Dispensar 200 ml en un autoclave de 15psi (1,05kg/cm2) y autoclave durante 15 minutos.

Preparar la solución de MgSO4 y la solución de CaCl2 por separado y esterilizarlas en autoclave. Diluir la solución salina 5×M9 a 980 ml con agua esterilizada y añadir soluciones de MgSO4 y CaCl2. La solución de glucosa se filtró a través de un filtro de 0,22 µm para eliminar las bacterias antes de agregar la solución salina de M9 diluida. Cuando se utiliza E. coli que contiene un operón biosintético de prolina cromosómicamente defectuoso [Δ(lac-proAB)] y un gen proAB complementario en el plásmido F', agregue lo siguiente al medio basal M9:

0,4% (m /v) Glucosa (Glucosa)

MgSO4-7H2O 5 mM

Tiamina 0,01%

Medio NZCYM

Al preparar cada litro de medio de cultivo, añadir:

Amina NZ 10g

NaCl 5g

Extracto de levadura 5g

Hidrolizado de proteína de caseína 1g

MgSO4-7H2O 2g

Agitar el recipiente hasta que el soluto se disuelva por completo.

Esterilice con vapor a 15 psi (1,05 kg/cm2) durante 20 minutos.

NZ Amino: Casein Hydrolyzate (ICN Biochemicals, Inc.

NZCYM, NZYM y NZM también están disponibles en medios deshidratados de BD Biscienses.

Medio NZYM

La composición del medio NZYM es la misma que la del medio NZCYM, excepto que no contiene hidrolizado de caseína.

NZM Medium

NZM Medium tiene los mismos ingredientes que NZYM Medium excepto que no contiene extracto de levadura.

Medio SOB

Al preparar cada litro de medio, añadir:

20 gramos de cromona

5 gramos de extracto de levadura p>

Cloruro de sodio 0,5 g

Agitar el recipiente para disolver completamente el soluto. Añadir 10 ml de solución de cloruro de potasio de 250 mmol/L (la solución de cloruro de potasio de 250 mmol/L se prepara disolviendo 1,86 g de cloruro de potasio en 100 ml de agua desionizada). Ajuste el pH a 7,0 con NaOH

Medio SOC

El medio SOC es igual que el medio SOB excepto que contiene 20 mmol/L de glucosa. Después de esterilizar en autoclave el medio SOB, enfríelo a 60 °C o menos, agregue 20 ml de solución de glucosa esterilizada de 1 mol/L (la preparación de una solución de glucosa de 1 mol/L consiste en disolver 18 gramos de glucosa en 90 ml de agua desionizada, y completamente Después de disolver, ajustar el volumen a 100 ml con agua desionizada, filtrar y esterilizar con filtro de 0,22 micras).

Caldo específico (también llamado medio TB, Tartof y Hobbs 1987)

Añadir 900 ml de agua desionizada por litro de medio:

Peptona 12 g

Extracto de levadura 24 g

Glicerina 4 ml

Agitar el envase para disolver completamente el soluto. Luego, esterilice con vapor a alta presión de 15 psi (1,05 kg/cm2) durante 20 minutos. Cuando la solución se enfríe a 60 °C o menos, agregue 100 ml de solución estéril de KH2PO4 de 0,17 mol/l y K2HPO4 de 0,72 mol/l. [Esta solución se obtiene disolviendo 2. Disuelva 2,31 g de KH2PO4 y 12,54 g de K2HPO4 en 90 ml por completo. disuelto en agua ionizada.

Medio 2×YT

Al preparar cada litro de medio, añadir:

16 gramos de peptona a 900 ml de agua desionizada

Extracto de levadura 10 g

Cloruro de sodio 5 g

Agitar el recipiente hasta disolver el soluto, ajustar el pH a 7 con NaOH 5N a 15 psi (1,05 kg/cm2). a alta presión durante 20 minutos.