Planeo utilizar 3 genes diana para PCR cuantitativa de fluorescencia, utilizando el gen ACTIN como referencia interna, para analizar su expresión en rizomas, raíces, tallos y hojas.

Si tiene controles negativos y positivos en su diseño experimental, o desea hacer comparaciones entre grupos, hágalo semicuantitativo porque incluso si realiza una cuantificación completa, cuando necesite hacer comparaciones, eventualmente regresará. a la tasa de conversión de relaciones relativas es sólo un gran desvío.

La semicuantitativa es relativamente simple

No es necesario hacer una curva estándar, que desperdicia 24 pozos si usa 96 pozos

Según su descripción. , debería ser 4. Haga un conjunto de 3 genes objetivo, permitiendo 6 pocillos replicados.

O reduzca el número de pocillos replicados para cada gen objetivo y diseñe 2-3 cebadores. Debido a que los cebadores son muy baratos, elija el. imprimación con la mejor curva de solución.

Cuando empieces a hacerlo, los pocillos de copia serán inestables. Después de que te familiarices con la operación varias veces y los valores de los pocillos de copia sean estables, puedes dejar de hacer pocillos de copia y. simplemente coloque este conjunto de muestras una por una.

En cuanto al análisis de datos, las máquinas de PCR en tiempo real vendrán con un software de análisis. Configure el control y la referencia interna. Si hay muestras en el mismo grupo, también deberá configurar el grupo biológico. seleccione el botón de análisis del punto de muestra y OK

Oh, también me gustaría agregar que las pistolas, las puntas de las pistolas, los tubos Octopus y los tubos EP deben importarse; de ​​lo contrario, el valor de la pared del reactivo excede con creces el valor. de consumibles importados y, lo que es más importante, es una pérdida de tiempo y materiales de muestra.