¿Cómo disolver y diluir correctamente los seis estándares ELISA?

La curva estándar de ELISA es la regla para calcular los resultados y el estándar es la clave para el éxito o el fracaso del experimento ELISA. ¿Cómo disolver y diluir adecuadamente los estándares?

1. Centrifugue el material estándar en polvo brevemente para permitir que el material estándar manchado en la cubierta y la pared del tubo debido al transporte se hunda hasta el fondo del tubo.

2. Agregue un cierto volumen de agua destilada según la etiqueta de la botella, agregue agua, agite suavemente y déjelo a temperatura ambiente durante 10-30 minutos para disolver completamente el polvo.

Nota: No utilice una pipeta para pipetear después de agregar agua, en caso de que la proteína no se disuelva y parte de la proteína salga por la punta de la pipeta. Después de que esté completamente disuelta, pipetee o. La vibración de vórtice se puede utilizar para mezclar.

3. Dilución en gradiente de la sustancia estándar:

(1) Selección del diluyente de la sustancia estándar:

Si se trata de una muestra de homogeneizado de suero, plasma o tejido. , Utilice el diluyente estándar del kit para diluir el estándar en forma de gradiente.

Si se trata de una muestra de sobrenadante celular, se recomienda utilizar medio de cultivo celular y estándares de dilución en gradiente.

(2) Preparación de consumibles: Preparar 8 tubos de centrífuga de 1,5Ml, escribir S1-S7 y dejarlos en blanco.

(3) Dilución en gradiente: Añadir un volumen igual de solución de dilución estándar (medio de cultivo) a cada tubo de centrífuga según las instrucciones. Pipetear el mismo volumen de solución estándar disuelta en el tubo S1, soplar 10 veces para mezclar y agitar durante 5 segundos; pipetear el mismo volumen de solución del tubo S1 al tubo S2, soplar 10 veces para mezclar y agitar durante 5 segundos.

(4) Control en blanco: Como blanco se utiliza la dilución estándar (medio de cultivo), es decir, la concentración es cero.

Nota: Para soluciones estándar diluidas en gradiente, puede centrifugar brevemente después de agitar y mezclar, de modo que el líquido en la tapa del tubo y la pared del tubo llegue al fondo del tubo y luego comenzar a diluir la siguiente concentración.

La disolución estándar y la dilución en gradiente son los puntos clave del experimento ELISA. Simplemente realice la dilución en gradiente según el método anterior.