Informe del experimento de antígeno de superficie de microbiología e inmunología
Principio experimental
Utilizando células de cáncer de colon humano como inmunógeno, inmunizando con anticuerpo monoclonal de ratón IgG (anticuerpo primario) contra antígenos de superficie de células de cáncer de colon humano, un Se produce una reacción antígeno-anticuerpo específica entre ellos para formar un complejo antígeno-anticuerpo, y luego se agrega un anticuerpo IgG anti-ratón de cabra (anticuerpo secundario) disponible comercialmente (o casero) marcado fluorescentemente, y el complejo sufre además una reacción antígeno-anticuerpo. (Reacción secundaria de anticuerpos) para observar antígenos en el cáncer de colon bajo microscopía óptica. Luego agregue anticuerpo IgG anti-ratón de oveja marcado fluorescentemente disponible comercialmente (o casero) (anticuerpo secundario), que puede reaccionar aún más con el complejo para formar un complejo antígeno-anticuerpo (reacción de anticuerpo secundario), de modo que La presencia de este antígeno en el La superficie de las células de cáncer de colon se observó bajo un microscopio óptico.
Materiales experimentales
Células HeLa
Reactivos/kits
Medio de cultivo 1640, suero de ternera, fijador de formaldehído, PBS, parafina líquida
p>
Instrumentos/consumibles
Cargador de cápsulas Frasco de cultivo Placa de Petri Papel de filtro Pinzas Pipeta Microscopio invertido Microscopio de fluorescencia Micromuestreador
Pasos experimentales
Pasos experimentales
1.p>
1. Inocular las células de cáncer de colon en el frasco de cultivo en una placa de cultivo cubierta con un cubreobjetos y cultivar durante 2 a 3 días.
2. Después de observar el buen crecimiento de las células en el cubreobjetos bajo un microscopio invertido, utilice un bolígrafo de vidrio para marcar la esquina superior izquierda del cubreobjetos para evitar volcarlo en futuras operaciones.
3. Coloque el cubreobjetos en fijador de formaldehído y fíjelo a 4 °C durante 5 a 10 minutos.
4. Lavar tres veces con PBS. Tenga cuidado de no verter la solución de PBS directamente sobre la superficie celular del cubreobjetos para evitar provocar una gran pérdida de células. Utilice papel de filtro para absorber suavemente el PBS en el cubreobjetos sin dañar la capa celular.
5. Colocar el anticuerpo de ratón diluido en el cubreobjetos. Añadir 50 µl a cada cubreobjetos e incubar a 37°C durante 30 minutos.
6. Enjuague tres veces con PBS y seque con papel de filtro.
7. Añadir 5 μl de anticuerpo secundario de cabra anti-ratón diluido y marcado con fluorescencia al cubreobjetos e incubar a 37°C durante 30 minutos.
8. Lavar tres veces con PBS y secar con papel de filtro.
9. Colocar una gota de parafina líquida sobre el portaobjetos. Luego, las células del cubreobjetos se colocaron boca abajo sobre un portaobjetos de vidrio y se observaron bajo un microscopio de fluorescencia.