Microarrays de ADN de microarrays
Los principales procesos de la tecnología de microarrays de ADN:
① Preparación de chips: los métodos de preparación de chips de ADN incluyen síntesis in situ guiada por luz, pulverización química, recubrimiento de puntos de contacto y ADN in situ. síntesis controlada, método de impresión micromecánica sin contacto TOPSPOT y replicación de fotolitografía suave, etc. Actualmente, en un chip de 1 cm2 se pueden colocar 400.000 moléculas de ADN diferentes.
②Preparación de muestras: incluye aislamiento y purificación de ADN o ARN de muestra, amplificación de fragmentos de genes diana mediante tecnología PCR y etiquetado de genes diana.
③Reacción de hibridación: seleccione las condiciones de reacción adecuadas para mantener la reacción entre biomoléculas en condiciones óptimas de reacción. La hibridación en chip es una hibridación en fase sólida-líquida. Hay muchos factores que afectan la hibridación, que incluyen: concentración objetivo, concentración de sonda, composición de secuencia de ambas partes de la hibridación, concentración de sal, temperatura y condiciones de lavado.
④ Detección y análisis de señales del chip: el gen objetivo en la muestra se hibrida específicamente con la sonda fijada en el chip y se une a diferentes puntos del chip. Las moléculas de fluoresceína son irradiadas por la luz de excitación de un. longitud de onda específica. Fluorescencia en longitudes de onda específicas. La señal hibridada se obtiene a través de un escáner específico. Actualmente, los escáneres de chips utilizados para el escaneo de chips incluyen: chip de escaneo con enfoque láser y escáner de chip CCD. Los datos obtenidos se procesan mediante un sistema de procesamiento especial, que incluye análisis estadístico y análisis biológico de los datos del chip. , acumulación y gestión de bases de datos de chips, búsqueda internacional en Internet de genes expresados en chips y análisis de bases de datos de genes expresados, etc.
La característica más destacada de la tecnología de microarrays de ADN es que puede detectar múltiples muestras a la vez y obtener perfiles de expresión diferencial de múltiples genes. Los microarrays de ADNc se han utilizado con éxito para detectar simultáneamente la expresión de más de 10.000 genes. . Por lo tanto, los microarrays de ADN son un nuevo método de análisis genético de alto rendimiento para el análisis comparativo paralelo de múltiples patrones de expresión genética en diferentes materiales. En comparación con los métodos tradicionales para estudiar la expresión diferencial de genes, tiene las ventajas de miniaturización, velocidad, precisión, alta sensibilidad y detección paralela de grandes cantidades de información en el mismo chip. La tecnología de microarrays de ADN ha logrado logros notables en la investigación, como la elaboración de mapas de expresión genética y la búsqueda de genes diana y genes funcionales. Sin embargo, su desventaja es que la prueba no necesita detectar todas las secuencias muestreadas y los instrumentos analíticos necesarios para la prueba son relativamente complejos. Además, la tecnología de microarrays de ADN tiene limitaciones en el análisis de transcripciones de baja abundancia. Para garantizar que se incluya una determinada transcripción de baja abundancia en el microarray de ADN, es necesario seleccionar una gran cantidad de clones para su amplificación y detección.