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¿Cuáles son los reactivos comúnmente utilizados en los laboratorios de microbiología? Espero que XDJM pueda darme alguna orientación.

Reactivos y medios de cultivo de uso común en los laboratorios de microbiología

Parte 1: Reactivos de uso común y sus usos

I. Papel de prueba de diagnóstico

① Trozo de papel de péptido de ratón (0,04U/pieza): una zona de inhibición de 10 mm se considera sensible. Cepas de control de calidad: negativas para estreptococos del grupo D y positivas para estreptococos del grupo A.

(2) Trozos de papel SMZ (1,25μg/pieza, 23,75μg/pieza): La presencia de una zona de inhibición indica sensibilidad. Cepas de control de calidad: positivas para estreptococos del grupo D y negativas para estreptococos del grupo A.

(3) Disco de neomicina (5,0 μg/tableta): la zona de inhibición ≥16 mm es sensible. Cepas de control de calidad: Staphylococcus epidermidis positivo, Staphylococcus saprophyticus negativo.

(4) Papel O129, papel Optochin: consulte la Parte 5 "Medio de prueba bioquímico".

2. Suero de diagnóstico

1. Suero de diagnóstico de Salmonella

(1) Suero de diagnóstico polivalente del grupo A-F O.

(2) Suero de diagnóstico del factor del grupo O específico: suero de diagnóstico O2, O4, O7, O9, O10 de uso común.

(3) Suero diagnóstico del factor H específico: Suero de diagnóstico comúnmente utilizado para los factores Ha, Hb, Hc, Hd, Hgm, Hi, Hf y Vi.

2. Suero diagnóstico Shigella

4 tipos de suero polivalente Shigella: Suero disentería Shigella tipo I y tipo II, Suero polivalente Shigella fusiformis y suero tipificador (tipos 1-6), Shigella suero de diagnóstico matsuuchi, suero polivalente de Shigella abortus y suero de tipificación.

3. Suero diagnóstico de Escherichia coli enteropatógena.

Suero diagnóstico de Escherichia coli enteropatógena (EPEC), Suero diagnóstico de Escherichia coli enterotoxigénica (ETEC), Suero diagnóstico de Escherichia coli enteroinvasiva (EIEC), Escherichia enterohemorrágica. coli (EHEC) suero de diagnóstico O157: H 7.

4. Vibrio cholerae O1, O139 suero mixto de diagnóstico multivalente y suero de tipificación (tipos 1-6). Suero de diagnóstico polivalente mixto O139 y suero de tipificación Inaba, Ogawa, Hikishima O139

5. Suero polivalente de Neisseria meningitidis y suero de subgrupo

6. Suero de diagnóstico de clasificación de Streptococcus

7. Suero de diagnóstico de Streptococcus pneumoniae

8. Suero de diagnóstico de Yersinia

3. Soluciones de tinción comunes

1 .Solución de tinción de Gram

( 1) Solución de cristal violeta, solución A: 20 g de cristal violeta, 20 ml de etanol al 95%; solución B: 0,8 g de oxalato de amonio, 80 ml de agua destilada;

24 horas antes de la tinción, mezclar el líquido A y el líquido B, filtrar y poner en frascos de reactivos para su uso posterior.

(2) Solución de yodo: 1g de yodo, 2g de yoduro de potasio, 300ml de agua destilada.

Mezclar y triturar el yodo y el yoduro de potasio, añadir unos mililitros de agua destilada para que se disuelva gradualmente, muela nuevamente y continúe. Agregue una pequeña cantidad de agua destilada hasta que el yodo y el yoduro de potasio se disuelvan por completo. Finalmente agregue agua. También puede usar una pequeña cantidad de agua destilada para disolver completamente el yoduro de potasio, luego agregar tabletas de yodo. Una vez que se haya disuelto por completo, agregue agua hasta 300 ml.

(3) Solución decolorante: etanol al 95 %

(4) Solución para volver a teñir: 2,5 gramos de kaempferol, 100 ml de solución de almacenamiento de etanol al 95 %, tomar 10 ml de Solución de almacenamiento. Añadir 90 ml de agua destilada como solución para untar.

2. Solución de tinción acidorresistente

(1) Solución de tinción roja básica: ① Solución de rojo de ácido carbónico Senatite: 10 ml de solución saturada de etanol rojo básico, solución de ácido carbólico al 5%. 90ml. Solución decolorante: 3ml de ácido clorhídrico concentrado, 97ml de etanol al 95%. Solución de tinción (solución de azul de Leffler): 30 ml de solución saturada de etanol azul, 0,1 ml de solución de hidróxido de potasio de 100 g/l, 0,1 ml de agua destilada. 0,1 ml, agua destilada 100 ml.

(2) Solución de tinción de auramina O-rodamina B: ①Solución de rodamina B: añadir 0,1 g de rodamina B a 100 ml de agua destilada.

Solución de tinción de rodamina B: 0,1 g de rodamina B, añadir 100 ml de agua destilada: 0,1 g de solución de auramina O, añadir 95 ml de agua destilada, añadir 5 ml de ácido fenol carbólico puro y mezclar. Etanol con ácido clorhídrico al 3%. Diluir la solución de azul de metileno: 100 ml de solución de Lüfler Meilan, añadir 90 ml de agua destilada y mezclar bien.

3. Solución de tinción de flagelos (método de Liu modificado)

Una solución: 10 ml de ácido carbólico al 5%, 2 g de ácido elágico, 10 ml de solución saturada de sulfato de aluminio y potasio; B Líquido: solución saturada de etanol cristal violeta. Al aplicar, tomar 10 partes de líquido A y 1 parte de líquido B, mezclar uniformemente y almacenar a temperatura ambiente para su uso posterior.

4. Solución de teñido granular metacromático

Solución A: 0,15 g de azul de toluidina, 2 g/L de verde malaquita, 2,0 ml de etanol al 95%, 100 ml de agua destilada. yoduro de potasio 3g, agua destilada 300ml.

Primero agregue yoduro de potasio a una pequeña cantidad de agua destilada (aproximadamente 2 ml), agite bien para disolver completamente, luego agregue yodo para disolver completamente, luego agregue yoduro de potasio al agua destilada (aproximadamente 2 ml). agite bien Deje que se disuelva completamente, luego agregue yodo para que se disuelva por completo, luego agregue yodo al agua destilada, agite bien para disolver completamente, luego agregue yodo al agua destilada, agite bien para disolver completamente, luego agregue yodo al agua destilada, agite bien para disolver completamente, luego agregue yodo al agua destilada, agite bien para disolver completamente, luego agregue yodo al agua destilada, agite bien para disolver completamente. Una vez completamente disuelto, agregar agua destilada hasta 300 ml.

5. Solución de tinción en cápsula

1) Tinta china o solución acuosa de melanina 50g/L

2) Solución acuosa de azul de anilina 5g/L.

Parte 2 Medio Básico

I. Medio Básico Líquido

1. Agua Peptona

[Uso]

Se utiliza para pruebas de sustrato de índigo bacteriano; cultivo y paso de bacterias generales.

[Preparación]

10g de peptona (o triptona), 5g de cloruro sódico, 1L de agua destilada.

Disolver los ingredientes anteriores en agua, corregir el valor del pH a 7,2, dividir en tubos de ensayo, de 2 a 3ml por tubo, y esterilizar a 121°C durante 15 minutos antes de su uso.

[Control de Calidad]

E. coli crece bien y la matriz índigo es positiva; Salmonella typhi crece bien y la matriz índigo es negativa.

2. Caldo nutritivo

[Uso]

Para el cultivo de enriquecimiento bacteriano general, también se puede utilizar la adición de agar en polvo al 1% como agar nutritivo.

[Método de preparación]

10g de peptona, 3g de extracto de ternera, 5g de cloruro sódico, 1L de agua destilada.

Pesar y mezclar las materias primas anteriores, disolverlas en agua, corregir el pH a 7,4 y distribuirlas en matraces o tubos de ensayo según los diferentes usos. Después de la esterilización a 121°C durante 15 minutos, realice una prueba de esterilidad y refrigere para su uso posterior.

【Control de Calidad】

Staphylococcus aureus, Salmonella typhi y Streptococcus pyogenes crecen bien.

[Guardar]

Refrigerar y utilizar en un plazo de 3 semanas.

3. Medio de extracto de carne

[Uso]

Es el medio más básico para el cultivo bacteriano. Además del cultivo bacteriano general, también puede serlo. Se utiliza como base de medios de cultivo como el agar nutritivo.

【Método de preparación】

500 gramos de carne de vacuno fresca, 5 gramos de cloruro sódico

10 gramos de peptona, 1 litro de agua destilada.

Primero lavar la carne, quitarle la grasa y los tendones, cortarla en trozos y triturarla en trozos. Pese 500 g, agregue 1 litro de agua destilada al recipiente, revuelva uniformemente y colóquelo en el refrigerador durante la noche. Hiérvalo y caliente durante 30 minutos al día siguiente mientras revuelve ocasionalmente. Use una varilla de vidrio mojada en franela o lino para una filtración aproximada y luego filtre. con algodón absorbente. Agregue 10 g de peptona y 5 g de cloruro de sodio al filtrado para disolverlo, use una solución de hidróxido de sodio para corregir el pH a 7,6 ~ 7,8, caliente y hierva durante 10 minutos, agregue agua destilada hasta 1 litro y finalmente filtre con papel de filtro para obtener una Líquido claro, transparente, de color amarillo claro. Después de 121°C Esterilizar durante 15 minutos y reservar.

[Cómo utilizar]

Dependiendo de los diferentes usos, se puede convertir en caldo nutritivo y utilizar como base para elaborar otros medios de cultivo.

Si prepara un medio de cultivo sólido, agregue 15-20 g/l de agar.

【Control de Calidad】

Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella typhi, Shigella disentería, etc. crecen bien.

【Almacenamiento】

Este producto se puede almacenar en un refrigerador a 4 ℃ durante mucho tiempo.

Nota: La dosis general de extracto de vacuno en polvo comercial es de 3-5g/L.

2. Medio de cultivo básico sólido

1. Agar nutritivo p>

[Uso]

Generalmente se utiliza para la purificación de bacterias y transferencia de cepas bacterianas. [Preparación]

10 gramos de peptona, 3 gramos de extracto de ternera, 5 gramos de cloruro sódico, 12 gramos de agar en polvo (alta calidad), 1 litro de agua destilada.

Disolver los ingredientes anteriores (excepto el agar) en agua, corregir el valor del pH a 7,2 ~ 7,4, luego agregar agar, extracto de carne, cloruro de sodio y agua destilada. Pasados los 4, añadir agar, hervir hasta disolver, envasar según diferentes usos, esterilizar a 121°C durante 15 minutos, verter en un plato plano o hacer una pendiente y refrigerar para su uso posterior

[

Estructura].

【Control de calidad】

Las colonias de Staphylococcus aureus son de color amarillo claro; las colonias de disentería de Shigella son incoloras; las colonias de Pseudomonas aeruginosa son incoloras o de color verde claro.

【Ahorrar】

Conservar en el frigorífico a 4 ℃ y utilizar en 2 semanas.

2. Medio agar sangre

[Uso]

Cultivo general de bacterias patógenas e identificación y conservación de cepas hemolíticas.

【Método de preparación】

Agar infusión de ternera pH 7,4~7,6 100ml, sangre desfibrinada de oveja (o sangre de conejo) 5~10ml.

La matriz de agar sangre se esteriliza a 121°C durante 15 minutos, se enfría a 50°C y se añade sangre de oveja de forma aséptica. Se agita bien y se vierte en una placa de Petri esterilizada inmediatamente después de la solidificación. , esterilizar Mantener refrigerado para experimentos bacterianos.

[Control de calidad]

Streptococcus pyogenes ATCC 19615 crece bien, con beta hemólisis; Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 crece bien, con alfa hemólisis; Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 crece bien, sin hemólisis.

[Guardar]

Colocar en el frigorífico a 4 ℃ y utilizar en 1 semana.

3. Medio agar chocolate

[Uso]

Se utiliza principalmente para el aislamiento y cultivo de Haemophilus, pudiendo utilizarse también para la proliferación de Neisseria.

[Preparación]

1 litro de extracto fresco de ternera, 10 gramos de peptona,

5 gramos de cloruro sódico, 12 gramos de agar en polvo, desfibrilación estéril

100 ml de sangre de oveja o sangre de conejo.

Calentar para disolver los ingredientes anteriores (excepto la sangre de conejo), ajustar el valor de pH a 7,2, esterilizar en autoclave a 121 °C durante 15 minutos y luego añadir sangre de conejo en condiciones asépticas a aproximadamente 85 °C. Agregue sangre de conejo de manera estéril, agite bien, colóquela en un baño de agua a 85°C y manténgala caliente durante 10 minutos hasta que adquiera un color chocolate. Sácalo y déjalo enfriar a temperatura ambiente, a unos 50 °C. Viértelo en un plato o hazlo en forma de pendiente y reserva.

【Control de Calidad】

Haemophilus influenzae ATCC 10211 y Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 crecen bien y tienen colonias típicas.

[Guardar]

Conservar en frigorífico a 4 ℃ y utilizar en 1 semana.

4. Agar cistina caseína

[Uso]

Comúnmente utilizado para la determinación de Neisseria meningitidis y Neisseria gonorrhoeae, así como los requerimientos nutricionales Prueba de glucólisis bacteriana.

[Método de preparación]

Cistina 0,5g, pancreatina 20g, cloruro sódico 5g, sulfito sódico 0,3g, agar 3,5g, rojo fenol 0,0175g, agua destilada 1L.

Mezclar y disolver los ingredientes anteriores (excepto el rojo fenol), ajustar el valor de pH a 7,2 y añadir el indicador rojo fenol.

[Uso]

Al medir la fermentación del azúcar, agregue varias soluciones de azúcar según sea necesario, coloque el objeto de prueba directamente en el tubo de cultivo y colóquelo en una incubadora a 35 °C, observe los resultados después de 18 a 24 horas.

Si el medio de cultivo cambia de rojo a amarillo es positivo, y si no hay cambio de color es negativo.

Tercera parte: Medio de preservación y enriquecimiento

1. Medio de conservación de bacterias

[Método de preparación]

10 gramos de peptona, 5 gramos de extracto de carne, 3 gramos de cloruro de sodio, 2 gramos de hidrogenofosfato disódico, 4,5 gramos de agar en polvo , Agua destilada 1 litro.

Mezcle las materias primas anteriores con agua, caliente para disolver, ajuste el valor de pH a 7,4 ~ 7,6, divídalo en tubos de ensayo de aproximadamente 2/3 de la altura y esterilice en autoclave a 121 °C durante 15 minutos para convertirse en un medio de cultivo semisólido para su uso posterior.

【Control de Calidad】

El medio de cultivo es semisólido de color amarillo claro. Escherichia coli (ATCC 25922) crece bien y es positiva; Shigella (ATCC 12022) crece bien y es negativa; Staphylococcus aureus (ATCC 25923) crece bien y es negativa;

II. Medio antibacteriano

1. Caldo de glucosa

[Uso]

Se utiliza para inhibir las bacterias de la sangre.

[Preparación]

10g peptona (o peptona), 5g cloruro sódico, 1L extracto de carne (o extracto de corazón), 3g glucosa, 3g citrato sódico, 5g/ 10 ml de L solución acuosa de ácido paraaminobenzoico, 20 ml de solución de sulfato de magnesio 1 mol/L y 1000 U de penicilinasa. Después de disolver, agregue glucosa, citrato de sodio, ácido paraaminobenzoico y sulfato de magnesio, continúe hirviendo durante 5 minutos para compensar el agua perdida y ajuste el valor del pH a 7,8.

Después de filtrar, colocar en frascos de 50 ml, esterilizar en autoclave a 115 ℃ durante 20 minutos, luego agregar 50 U de penicilinasa a cada frasco y enfriar para su uso posterior después de pasar la prueba de esterilidad.

[Uso]

Inyecte la muestra de sangre extraída en una botella de cultivo (1 ml de sangre, 10 ml de medio de cultivo) mediante operación aséptica, colóquela en una incubadora a 35 °C y tómela. todos los días Una observación. Si hay crecimiento bacteriano, puede tener varias manifestaciones diferentes y debe aislarse y cultivarse en cualquier momento. Se pueden utilizar placas de agar sangre, agar eritromicina y agar chocolate. Los frascos que no muestren crecimiento bacteriano deben observarse continuamente durante 7 días y los frascos que no muestren crecimiento bacteriano deben desecharse. Durante el proceso de observación se deben realizar al menos dos cultivos de aislamiento.

Nota:

(1) El citrato de sodio es un anticoagulante que puede evitar que la sangre añadida al medio de cultivo se coagule.

(2) El ácido paraaminobenzoico neutraliza principalmente el efecto antibacteriano de las sulfas en la sangre.

(3) El sulfato de magnesio inhibe principalmente los efectos antibacterianos de la tetraciclina, clortetraciclina, neomicina, polimixina y estreptomicina en la sangre.

(4) Este medio tiene muchas fórmulas mejoradas en los últimos años, como agregar de 0,3% a 0,5% de extracto de levadura para aumentar la nutrición; agregar 0,2% de ácido nucleico para estimular el crecimiento bacteriano y agregar 0,1% de proteína de mucílago; recubrirse sobre la superficie de las bacterias para protegerlas del daño de los anticuerpos; la adición de polianisulfato de sodio (SPS) puede neutralizar el efecto de desintoxicación del complemento y aumentar la tasa de detección.

2. Medio de enriquecimiento sanguíneo

[Uso]

Cultivo de enriquecimiento de bacterias patógenas en sangre y líquido de médula ósea.

[Preparación]

10 g de peptona, 5 g de cloruro de sodio, 3 g de extracto de ternera, 1 g de glucosa, 3 g de extracto de levadura en polvo, 3 g de citrato de sodio, 2 g de hidrogenofosfato dipotásico, 5 g/L de para- solución de ácido aminobenzoico 5 ml, solución de sulfato de magnesio 1 mol/L 20 ml, solución de rojo fenol 4 g/L 6 ml, penicilinasa 50 U, polianisulfato de sodio (SPS) 0,3 g, agua destilada 1 L.

Mezcle y caliente para disolver los ingredientes anteriores (excepto el indicador rojo fenol y la penicilinasa), corrija el pH a 7,4, luego agregue rojo fenol, filtre, llene cada botella con 30-50 ml y esterilice a 121°. C durante 15 minutos, prueba de esterilidad a 35 ℃ durante 24 horas. Cuando lo use, agregue 1,5 ~ 2,5 U de penicilinasa a cada frasco.

[Control de calidad]

Salmonella typhi ATCC 50096, Candida albicans ATCC 10231, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Staphylococcus aureus ATCC 25923, aeruginosa Pseudomonas ATCC 27853 crecieron bien .

3. Medio de enriquecimiento de selenita

[Uso]

Medio de enriquecimiento de Salmonella.

[Preparación]

Peptona 5g, lactosa 4g, hidrogenofosfato disódico 4,5g, dihidrogenofosfato sódico 5,5g, hidrogenoselenita sódica 4g, agua destilada 1L.

En primer lugar, añade selenito de sodio a 200 ml de agua destilada y agita para que se disuelva. Después de pesar y mezclar los demás ingredientes, agregue 800 ml de agua destilada, caliente para disolver, mezcle los dos líquidos después de enfriar, agite bien y corrija el valor de pH a 7,0 ~ 7,1 (corrija el valor de pH ajustando la proporción del tampón de fosfato par). Finalmente, distribuir en tubos de ensayo de 15×150 mm, 10 ml por tubo, hervir en un baño de agua durante 10 a 15 minutos, enfriar inmediatamente y almacenar en un refrigerador a 4°C para su uso posterior.

[Uso]

Tome 1 g de muestra fresca o un hisopo de algodón y colóquelo directamente en el tubo de cultivo. Agitar bien e incubar a 35°C durante la noche. Si se encuentra que la turbidez es uniforme y hay un precipitado rojo en el fondo del tubo, indica crecimiento bacteriano. Luego se toma el cultivo, se aísla y se cultiva en medios selectivos como agar SS, placas de agar MacConkey, etc.

[Control de Calidad]

El medio de cultivo debe ser de color amarillo claro o incoloro, transparente y libre de precipitaciones. Sensibilidad de enriquecimiento: 1×10-5 para Salmonella typhi, 1×10-7 para Salmonella typhimurium y Salmonella paratyphi.

[Guardar]

Guardar a 4℃ y utilizar en 1 semana.

Notas:

(1) El selenito incluye selenito de sodio y selenito de hidrógeno de sodio, pero el selenito de hidrógeno de sodio es más efectivo.

(2) Un par de tampones de fosfato. La proporción de dosificación de los dos está relacionada con los tipos de selenito y peptona. La depuración debe realizarse antes de la preparación y la cantidad total es de 10 g/l.

(3) Durante el proceso de preparación, el selenita no se puede calentar directamente. El tiempo de ebullición en agua no debe exceder el tiempo especificado, de lo contrario el selenita se deteriorará y producirá un precipitado rojo.

(4) El medio de cultivo debe ser de color amarillo claro y no se puede utilizar si hay precipitado rojo.

Solución de enriquecimiento 4.SS

[Método de uso]

Se utiliza para el enriquecimiento de Salmonella y Shigella.

[Preparación]

2 gramos de peptona, 8 gramos de peptona, 3,5 gramos de extracto de ternera, 2 gramos de extracto de levadura, 2 gramos de glucosa, 10 gramos de citrato férrico, tiosulfato 10 gramos de sodio, 0,7 g de sulfito de sodio, 5,5 g de sales biliares, 4 g de hidrogenofosfato de disodio, 0,1 g de dihidrogenofosfato de potasio, 1,5 g de desoxicolato de sodio (importado), 0,005 g de verde brillante y 1 litro de destilado agua.

Calentar y disolver las materias primas anteriores en agua, ajustar el valor de pH a 7,1, distribuirlo en tubos de ensayo (15×150 mm), de 5 a 7 ml por tubo, agregar agua y hervir durante 5 minutos antes de usar. .

[Uso]

Tome 1 g de muestra de heces y colóquelo directamente en la solución de enriquecimiento bacteriano, cultívelo a 35 ℃ durante 16 ~ 18 horas, sáquelo y transfiéralo a el medio de aislamiento.

[Control de Calidad]

El medio de cultivo debe ser de color amarillo claro o ligeramente verde claro. Salmonella Typhimurium ATCC 50096 y Shigella ATCC 12022 crecieron bien; Escherichia coli ATCC 25922 creció inhibida.

Notas:

(1) No utilizar alta presión y hervir durante no más de 5 minutos.

(2) La cantidad de amarillo y verde debe aumentarse o disminuirse según los diferentes lotes de productos.

5. Agua peptonada alcalina

[Uso]

Cultivo bacteriano de Vibrio cholerae.

[Método de preparación]

20 gramos de peptona, 5 gramos de cloruro sódico, 100 ml de agua destilada.

Disolver las materias primas anteriores en agua, corregir el pH a 8,6, dividir en alícuotas en tubos de ensayo de 8 a 10 ml y esterilizar a 121 °C durante 15 minutos antes de su uso.

[Uso]

Inocular el objeto a probar en agua de peptona alcalina y cultivarlo a 35°C durante 6 a 8 horas. Vibrio cholerae crecerá uniformemente y se volverá turbio, y. Aparecerá una película bacteriana en la superficie.

Tome un anillo de platino de bacterias de la superficie y transfiéralo a una placa de agar alcalino, agar Genta o agar TCBS. Realice un segundo enriquecimiento si es necesario.

[Control de calidad]

Las cepas estándar se pueden usar en laboratorios con condiciones, y los Vibrios que no pertenecen al Grupo 01 se pueden usar en laboratorios clínicos generales. Se pueden usar aquellos que crecen bien después del cultivo. usado. Vibrio cholerae biotipo E1-Tor y Vibrio parahaemolyticus crecieron bien (6 horas); Escherichia coli ATCC 25922 no creció (6 horas).

【Conservación】

Conservar en frigorífico a 4°C y utilizar en 2 semanas.

Nota: Si agrega 0,5 ~ 1,0 ml de solución de telurato de potasio al 1% por litro de agua de peptona alcalina, se convertirá en agua de peptona alcalina de telurato de potasio, que es más ideal para el enriquecimiento bacteriano.

Parte 4 Medio de aislamiento

1. Medio de aislamiento de bacilos grampositivos

1. Medio modificado Luo-Qin

[Uso]

Se utiliza para el cultivo de Mycobacterium tuberculosis.

【Preparación】

Dihidrogenofosfato de potasio 2,4 g, sulfato de magnesio 0,24 g, citrato de magnesio (o citrato de sodio) 0,6 g, ácido aspártico 3.

Primero , calentar y disolver dihidrógenofosfato de potasio, sulfato de magnesio, citrato de magnesio, ácido aspártico y glicerina en 600 ml de agua destilada. Luego agregue la harina de papa, revuelva mientras la pone, continúe calentando en agua hirviendo durante 30 minutos, cuando se enfríe a aproximadamente 60 ° C, agregue 1 litro de solución de huevo de gallina y 20 ml de solución de verde de malaquita, mezcle bien y ensamble con una operación estéril. Ponerlo en un tubo de ensayo esterilizado, de 5 a 6 ml cada uno, taparlo con un tapón de goma (es mejor girar el tapón), colocarlo en una pendiente hecha de solución de coagulación sérica y esterilizarlo dos veces de forma intermitente a 85°C. durante 1 hora (o usar un autoclave para esterilizar) a 115°C durante 20 minutos), someterse a pruebas de esterilidad después de la solidificación y refrigerar a 4°C para su uso posterior.

[Uso]

Tome muestras de esputo de la tos matutina u otros fluidos corporales, digiéralas y centrifugúelas, concéntrelas en 0,1 ml (aproximadamente 2 gotas) y colóquelas en el medio de cultivo inclinado. en el tubo, agítelo lo más uniformemente posible, colóquelo en una incubadora de dióxido de carbono a 35 °C con una concentración del 5 % al 10 % y cultívelo durante 1 a 4 semanas y observe los resultados. Si se descubre que las colonias crecen dentro de 1 semana, generalmente es poco probable que se trate de Mycobacterium tuberculosis; si se descubre que las colonias crecen después de 2 semanas y tienen un aspecto de color blanco lechoso, amarillento, áspero y opaco, las bacterias se toman para teñirlas y realizar un examen microscópico; para identificación.

[Control de Calidad]

La prueba de cultivo de Mycobacterium tuberculosis fue positiva.

[Guardar]

Será efectivo después de colocarlo en un refrigerador a 4 ℃ durante 2 a 4 semanas.

Nota:

(1) Este medio de cultivo está modificado según el diseño de Lowenstein-Jenden.

(2) El valor de pH de este medio de cultivo es de aproximadamente 6,0 y, por lo general, no es necesaria ninguna corrección.

(3) La temperatura para la esterilización intermitente no debe exceder los 90°C.

2. Medio inclinado de suero (suero inclinado de Lüscher)

[Uso]

Se utiliza para el cultivo de Corynebacterium diphtheriae.

[Preparación]

100ml de caldo de glucosa al 1% (pH 7,6), 300ml de suero animal estéril (vaca, oveja, cerdo, conejo).

Mezclar los ingredientes anteriores y distribuirlos en tubos de ensayo, unos 4 a 5 ml por tubo. Insértelo oblicuamente en un coagulador de suero (o vaporizador) y caliéntelo a 80 ~ 85 °C durante 30 minutos para coagular el suero en un plano inclinado. Después de enfriarlo, colóquelo en un refrigerador a 4 °C. Después de sacarlo, utilice el método de esterilización intermitente a 85°C durante 30 minutos durante 3 días consecutivos. Puede utilizarse después de que la prueba de esterilidad demuestre que no hay crecimiento de bacterias extrañas.

Reactivos y medios de cultivo de uso común en laboratorios de microbiología Sección 1 Reactivos de uso común y sus usos Clasificación: Columna predeterminada 2006.2.21 20:54 Autor: hbmzhsh Comentarios: 2 Lectura: 1037

Reactivos y medios de uso común en laboratorios de microbiología

Sección 1 Reactivos de uso común y sus usos

1. Papel de diagnóstico

1) Papel de péptido de ratón (0,04 U/pieza): La zona de inhibición >10mm se considera sensible. Cepas de control de calidad: negativas para estreptococos del grupo D y positivas para estreptococos del grupo A.

(3) Disco de neomicina (5,0 μg/tableta): la zona de inhibición ≥16 mm es sensible. Cepas de control de calidad: Staphylococcus epidermidis positivo, Staphylococcus saprophyticus negativo.

(4) Papel O129, papel Optochin: consulte la Parte 5 "Medio de prueba bioquímico".

2. Suero de diagnóstico

1. Suero de diagnóstico de Salmonella

(1) Suero de diagnóstico polivalente del grupo A-F O.

(2) Suero de diagnóstico del factor del grupo O específico: suero de diagnóstico O2, O4, O7, O9, O10 de uso común.

(3) Suero diagnóstico del factor H específico: Suero de diagnóstico comúnmente utilizado para los factores Ha, Hb, Hc, Hd, Hgm, Hi, Hf y Vi.

2. Suero diagnóstico Shigella

3. Suero diagnóstico de Escherichia coli enteropatógena.

5. Suero polivalente de Neisseria meningitidis y suero de subgrupo

6. Suero de diagnóstico de clasificación de Streptococcus

7. Suero de diagnóstico de Streptococcus pneumoniae

8. Suero de diagnóstico de Yersinia

3. Soluciones de tinción comunes

1 .Solución de tinción de Gram

( 1) Solución de cristal violeta, solución A: 20 g de cristal violeta, 20 ml de etanol al 95%; solución B: 0,8 g de oxalato de amonio, 80 ml de agua destilada;

24 horas antes de la tinción, mezclar el líquido A y el líquido B, filtrar y poner en frascos de reactivos para su uso posterior.

(2) Solución de yodo: 1g de yodo, 2g de yoduro de potasio, 300ml de agua destilada.

(3) Solución decolorante: etanol al 95 %

2. Solución de tinción acidorresistente

(2) Solución de tinción de auramina O-rodamina B: ①Solución de rodamina B: añadir 0,1 g de rodamina B a 100 ml de agua destilada. Solución de tinción de rodamina B: 0,1 g de rodamina B, añadir 100 ml de agua destilada: 0,1 g de solución de auramina O, añadir 95 ml de agua destilada, añadir 5 ml de ácido fenol carbólico puro y mezclar. Etanol con ácido clorhídrico al 3%. Diluir la solución de azul de metileno: 100 ml de solución de Lüfler Meilan, añadir 90 ml de agua destilada y mezclar bien.

3. Solución de tinción de flagelos (método de Liu modificado)

Una solución: 10 ml de ácido carbólico al 5%, 2 g de ácido elágico, 10 ml de solución saturada de sulfato de aluminio y potasio; B Líquido: solución saturada de etanol cristal violeta. Al aplicar, tomar 10 partes de líquido A y 1 parte de líquido B, mezclar uniformemente y guardar a temperatura ambiente para su uso posterior.

4. Solución de teñido granular metacromático

Solución A: 0,15 g de azul de toluidina, 2 g/L de verde malaquita, 2,0 ml de etanol al 95%, 100 ml de agua destilada. yoduro de potasio 3g, agua destilada 300ml.

5. Solución de tinción en cápsula

(1) Tinta china o solución acuosa de melanina 50 g/L.

(2) Solución acuosa de azul de anilina 5 g/L.

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¿Cuáles son los reactivos comúnmente utilizados en los laboratorios de microbiología? Espero que XDJM pueda darme alguna orientación.

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