Cómo disolver y diluir correctamente los estándares ELISA

La curva estándar de ELISA es la regla para calcular los resultados y el estándar es la clave del éxito del experimento ELISA. ¿Cómo disolver y diluir correctamente los estándares?

1. Centrifugue el estándar en polvo brevemente para permitir que el estándar que se ha manchado en la cubierta y la pared del tubo debido al transporte se hunda hasta el fondo del tubo.

2. Agregue un cierto volumen de agua destilada según la etiqueta de la botella, agregue agua, agite suavemente y deje reposar a temperatura ambiente durante 10-30 minutos para permitir que el polvo se disuelva por completo.

Nota: No sople con una pipeta después de agregar agua para evitar que la proteína no disuelta y la punta de la pipeta saque parte de la proteína. Una vez que se haya disuelto por completo, puede mezclar con una tubería o con un agitador vortex.

3. Dilución en gradiente estándar:

(1) Selección del diluyente estándar:

Para muestras de suero, plasma y homogeneizado de tejido, utilice la solución de dilución estándar en el kit, estándar de dilución en gradiente.

Si se utiliza la muestra de sobrenadante celular, se recomienda utilizar medio de cultivo celular para diluir el estándar en forma de gradiente.

(2) Preparación de consumibles: Preparar 8 tubos de centrífuga de 1,5Ml, escribir S1-S7 y dejar en blanco.

(3) Dilución en gradiente: Según las instrucciones, añadir un volumen igual de solución de dilución estándar (medio de cultivo) a cada tubo. Pipetear el mismo volumen de estándar disuelto en el tubo S1, mezclar pipeteando 10 veces y agitar durante 5 segundos. Pipetee el mismo volumen de solución del tubo S1 al tubo S2, mezcle pipeteando 10 veces y agite durante 5 segundos. Diluir la concentración de S3-S7 de la misma manera.

(4) Blanco: Como blanco se utiliza el diluyente estándar (medio de cultivo), que es de concentración cero.

Nota: Al diluir el estándar en forma de gradiente, agite y mezcle antes de centrifugar brevemente para permitir que el líquido de la tapa y la pared llegue al fondo del tubo antes de comenzar a diluir la siguiente concentración.

La disolución y la dilución en gradiente del estándar son los puntos clave del experimento ELISA. Simplemente siga el método anterior para la dilución en gradiente.