Cómo detectar el número total de colonias
Las operaciones básicas generalmente incluyen: diluir la muestra - verter en la placa de petri - incubar durante 48 horas - informe de conteo.
Los métodos para medir el número total de colonias bacterianas en el país y en el extranjero son básicamente los mismos. No hay diferencias obvias desde el procesamiento de muestras, la dilución, el vertido de placas de Petri hasta los informes de conteo, pero existen ligeras diferencias. En algunos requisitos específicos, por ejemplo, los países tienen diferentes requisitos para la dilución y el vertido de muestras. Existen regulaciones relativamente específicas sobre el caudal de la pipeta, la amplitud, el tiempo y el número de diluciones, y el tiempo de colocación del medio de cultivo.
Para conocer el método de inspección, consulte:
GB4789.2-94 "Determinación del número total de colonias en las Normas de Inspección Microbiológica de Higiene de los Alimentos de la República Popular China"
SN0168-92 "Recuento de colonias de alimentos de exportación estándar de la industria de inspección de productos básicos de importación y exportación de la República Popular de China"
3. Instrucciones de uso
(1) Procesamiento y procesamiento de muestras. dilución:
1. Método de operación: Tome 25 g (o 25 ml) de la muestra mediante operación aséptica, colóquela en una botella de vidrio esterilizada con 225 ml de solución salina fisiológica estéril u otro diluyente (se coloca una cantidad adecuada de perlas de vidrio en la botella con anticipación) o en un recipiente esterilizado. , y bien Después de agitar, haga una dilución uniforme o líquido de molienda de 1:10.
Después de agregar el diluyente, lo mejor es colocar el homogeneizador de esterilización a una velocidad de 8000 ~ 10000 r/min durante 1 minuto para hacer una dilución uniforme de 1:10.
Utilice una pajita estéril de 1 ml para absorber 1 ml de dilución 1:10 e inyéctela lentamente a lo largo de la pared del tubo en un tubo de ensayo que contenga 9 ml de solución salina estéril u otro diluyente.
Agite la Tubo de ensayo bien, hacer una dilución 1:100.
Utilice nuevamente una pipeta estéril de 1 ml y siga la secuencia de operación anterior para preparar una dilución incremental de 10 veces. De esta manera, reemplace la pipeta estéril de 1 ml una vez por cada dilución incremental.
2. Operación aséptica: Durante la operación se debe utilizar el concepto de "operación aséptica", y la cristalería utilizada debe estar completamente esterilizada sin bacterias residuales ni sustancias antibacterianas. También deberán esterilizarse las tijeras, pinzas y demás utensilios utilizados. Si la muestra está empaquetada, la abertura del empaque debe limpiarse con etanol al 75% para tomar la muestra.
La operación debe realizarse sobre una mesa de trabajo limpia o en una habitación estéril. Las placas de agar deben exponerse a la mesa durante 15 minutos, con no más de 15 colonias en cada placa.
3. Representatividad del muestreo: Para muestras sólidas, el muestreo no debe concentrarse en un punto, sino que debe realizarse en varias muestras. Las muestras sólidas deben homogeneizarse o molerse y las muestras líquidas deben agitarse para obtener una dilución uniforme.
4. Error de dilución de la muestra: Para reducir el error de dilución de la muestra, durante la dilución en serie, agite bien la muestra para que quede uniforme y reemplace la pipeta con cada dilución.
Durante la dilución en serie, el líquido de la pipeta debe fluir a lo largo de la pared del tubo y no dejar que la punta de la pipeta entre en el diluyente para evitar que la solución de prueba adherida al exterior de la pipeta se disuelva en él.
Para reducir el error de dilución, utilice el estándar SN para tomar 10 ml de dilución e inyectarlos en 90 ml de tampón.
5. Diluyente: el diluyente de la muestra es principalmente solución salina fisiológica esterilizada, y algunos usan tampón de fosfato (o agua con peptona al 0,1%). Este último tiene un cierto efecto sobre las células bacterianas destruidas en los alimentos. . Si diluye alimentos con un alto contenido de sal (como la salsa de soja), utilice agua destilada esterilizada.