¿Cómo detectar miARN en exosomas?
Extracción de exosomas: primero, los exosomas se extraen de muestras como el sobrenadante de cultivos celulares, plasma y orina. Se pueden utilizar kits comerciales de extracción de exosomas, siguiendo las instrucciones proporcionadas por el fabricante.
Extracción de ARN total: El ARN total, incluido el miARN, se extrae de las muestras de exosomas extraídas. Los métodos comúnmente utilizados para la extracción de ARN total incluyen el método de fenol/cloroformo o kits comerciales de extracción de ARN. El proceso de extracción se realizó como se describe para el método elegido.
Transcripción inversa: Utilice la transcriptasa inversa para transcribir el ARN total extraído en ADNc. El miARN suele ser una molécula de ARN corta, por lo que es necesario utilizar un kit de transcripción inversa exclusivo para miARN. Para conocer métodos específicos, consulte las instrucciones del kit seleccionado.
Amplificación de miARN: utilizar el ADNc obtenido tras la transcripción inversa para realizar la amplificación de miARN. Los métodos comúnmente utilizados incluyen PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR), micromatrices de miARN y secuenciación de alto rendimiento. Elija un método de amplificación de miARN apropiado y siga los pasos experimentales correspondientes.
Análisis de datos: Realizar análisis e interpretación de datos en función de los resultados de la amplificación de miARN. Para qPCR, generalmente se usa la cuantificación relativa o la cuantificación absoluta (por ejemplo, el método de la curva estándar) para analizar los niveles de expresión de miARN. Para datos de microarrays y secuenciación, se pueden utilizar diferentes herramientas bioinformáticas para análisis de expresión diferencial, análisis de enriquecimiento, etc.
Los métodos para detectar miARN varían según el propósito del experimento y el tipo de muestra. Por lo tanto, antes de realizar experimentos, es mejor consultar la literatura relevante o consultar a expertos para obtener consejos y orientación más específicos.