¿Cuál es el nombre completo del experimento wb?

El nombre completo del experimento wb es experimento de transferencia Western. Westernblot (WB) es un método experimental comúnmente utilizado en el diagnóstico de muchas enfermedades infecciosas. En lo que respecta al diagnóstico etiológico del VIH, es el método experimental preferido para determinar los antígenos del VIH, y los resultados de la prueba WB se utilizan a menudo como estándar de oro para distinguir las ventajas y desventajas de otros métodos de detección.

Pasos experimentales de wb

Preparación de la muestra: tampón de lisis o sonicación. (Para utilizar el tampón de lisis RIPA, se deben agregar inhibidores de proteasa en una proporción de 100:1). Electroforesis: determine la concentración de gel PAGE adecuada según el tamaño de la proteína. Se recomienda cargar entre 20 y 30 g de proteína total. Transferencia de película: Se puede utilizar transferencia húmeda y transferencia semiseca. Sin embargo, cuando el peso molecular de la proteína a detectar es mayor o menor, el método de transferencia húmeda es mejor. Lavado de membrana: 10min/tiempo*3 veces.

Cerrar: Se cierra el TBST que contiene un 5% de leche desnatada en polvo durante 1 hora. Lavar la membrana: lavar en TBST durante 10 minutos. Incubación - Anticuerpos: - Los anticuerpos deben diluirse en tampón TBST que contenga 5% de BSA o 5% de leche desnatada. Seleccione la proporción de dilución adecuada según las instrucciones del producto. Se recomienda un tampón TBST al 5% de leche desnatada en polvo porque el fondo es relativamente bajo. -Mejor resistente a la incubación durante la noche a 4°C.

Lavado de membrana: 10min/tiempo*3 veces. Incubación de anticuerpos secundarios: se recomienda diluir en TBST que contenga un 5 % de leche desnatada; el fabricante de referencia de anticuerpos secundarios recomienda seleccionar una proporción de dilución de anticuerpos secundarios adecuada. Lavado de membrana: 10min/tiempo*3 veces. Detección: Detección por quimioluminiscencia.