¿Cuál es el nombre completo del experimento wb?
Pasos experimentales de wb
Preparación de la muestra: tampón de lisis o sonicación. (Para utilizar el tampón de lisis RIPA, se deben agregar inhibidores de proteasa en una proporción de 100:1). Electroforesis: determine la concentración de gel PAGE adecuada según el tamaño de la proteína. Se recomienda cargar entre 20 y 30 g de proteína total. Transferencia de película: Se puede utilizar transferencia húmeda y transferencia semiseca. Sin embargo, cuando el peso molecular de la proteína a detectar es mayor o menor, el método de transferencia húmeda es mejor. Lavado de membrana: 10min/tiempo*3 veces.
Cerrar: Se cierra el TBST que contiene un 5% de leche desnatada en polvo durante 1 hora. Lavar la membrana: lavar en TBST durante 10 minutos. Incubación - Anticuerpos: - Los anticuerpos deben diluirse en tampón TBST que contenga 5% de BSA o 5% de leche desnatada. Seleccione la proporción de dilución adecuada según las instrucciones del producto. Se recomienda un tampón TBST al 5% de leche desnatada en polvo porque el fondo es relativamente bajo. -Mejor resistente a la incubación durante la noche a 4°C.
Lavado de membrana: 10min/tiempo*3 veces. Incubación de anticuerpos secundarios: se recomienda diluir en TBST que contenga un 5 % de leche desnatada; el fabricante de referencia de anticuerpos secundarios recomienda seleccionar una proporción de dilución de anticuerpos secundarios adecuada. Lavado de membrana: 10min/tiempo*3 veces. Detección: Detección por quimioluminiscencia.