¿Qué kit es mejor para la PCR cuantitativa por fluorescencia en tiempo real?

Qué kit es mejor para la PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real:

Tengo muchos tipos de kits cuantitativos de fluorescencia. De hecho, estos instrumentos de muestra, reactivos y materiales son todos similares, pero. el más grande es La diferencia radica en la especificidad de los consumibles posteriores. Vale la pena considerarlo. Ignore lo que dicen los vendedores o combínelo con su trabajo. ¿Debería utilizar un kit ya preparado o desarrollarlo usted mismo? ¿Qué tan grande es el tamaño de la muestra? ¿El objeto de detección es conocido o desconocido?

Después de confirmar lo anterior, veamos los puntos que vale la pena destacar:

Por ejemplo, los consumibles más caros del experimento son la transcriptasa inversa en el kit de transcripción inversa, que utiliza el la menor cantidad. Sea rápido, compre un kit nuevo una vez que se le acabe. Cada pocillo accesorio de SybGreen requiere 5 ul y cada gen requiere 3 pocillos accesorios (para detectar la repetibilidad, cada muestra necesita establecer un gen de referencia interno, por lo que si crea un gen objetivo, cada muestra tendrá 6 pocillos accesorios y se ejecutará). una vez. La PCR fluorescente requiere 30 ul. Si se realizan dos, habrá 9 pocillos secundarios y una ejecución requerirá 45 ul. Generalmente se hace con SYBR Green Mix, pero aquí se recomienda usar EvaGreen. La sensibilidad y el paralelismo son mejores que SYBR Green. Y si usa ABI o Stratagene PCR, debe agregar un paso de Rox. SYBR Green, que es muy problemático. Fluorescent PC presta atención a la operación precisa, por lo que las muestras que haga al principio son casi solo para practicar. El error resultante (error CP) será muy grande y definitivamente necesitará volver a ejecutarlo. 4 veces.