Determinación de la calidad de la proteína enzimática

Método de determinación de la concentración de proteína enzimática: Estrictamente hablando, la concentración de enzima se refiere a la concentración masiva de moléculas de enzima, que comúnmente se expresa como concentración de proteína enzimática. Hay cientos de enzimas en los fluidos corporales humanos. Con la excepción del lipopolisacárido, LCAT, colinesterasa y cobre oxidasa (CER), la mayoría de las enzimas estaban presentes en niveles aún más bajos, al nivel de microgramos/litro. Por tanto, la determinación de la concentración de actividad enzimática es el principal método de determinación. Desde la década de 1970, con el desarrollo de nuevas tecnologías, especialmente tecnologías inmunológicas, han surgido muchos métodos nuevos en el análisis cuantitativo de enzimas. Estos métodos determinan directamente la calidad de las proteínas enzimáticas mediante reacciones antígeno-anticuerpo. Los métodos para medir la concentración de enzimas en el país y en el extranjero incluyen la electroforesis, la cromatografía en columna y los métodos inmunoquímicos, entre los cuales se utilizan ampliamente los métodos inmunoquímicos. El método inmunoquímico utiliza la antigenicidad de la proteína enzimática para preparar anticuerpos específicos y luego utiliza métodos inmunológicos para determinar la concentración de la enzima. Los métodos inmunoquímicos utilizados para la determinación de la concentración de enzimas incluyen inmunosupresión, inmunoprecipitación, radioinmunoensayo (RIA), inmunoensayo de quimioluminiscencia (CLIA), inmunoensayo enzimático (EIA), inmunoensayo enzimático fluorescente (FEIA), etc. Entre ellos, los dos primeros métodos se pueden usar para determinar la concentración de actividad enzimática y los otros métodos se pueden usar para determinar la concentración de proteína enzimática. Por ejemplo, el método de inmunosupresión se utiliza para medir la actividad de CK-MB y el método de inmunoprecipitación se utiliza para medir la actividad de la superóxido dismutasa (SOD). La tripsina y la elastasa se midieron mediante radioinmunoensayo, la CK-MB se midió mediante el método CLIA y la enolasa neuronal específica se midió mediante el método ELISA.

La CK-MB es un indicador importante para diagnosticar el IAM y medir el tamaño del infarto de miocardio. Al evaluar la eficacia diagnóstica del IAM en el extranjero, a menudo se determina la calidad de la CK-MB, es decir, se determina la calidad de la CK-MB. La calidad de CK-MB generalmente se mide preparando anticuerpos anti-CK-M y anticuerpos anti-CK-B o usando anticuerpos CK-MB y usando CLIA, ELISA, FEIA y otros métodos. Estos métodos son adecuados para el análisis clínico automático y tienen las características de un tiempo de determinación corto (hasta 7 minutos) y una alta sensibilidad (límite de detección más bajo).

Debido a los diferentes métodos de determinación de la concentración de enzimas, los métodos de informe son también es diferente: la unidad de concentración de actividad enzimática a menudo se informa en U/L, la unidad de concentración de masa de enzima a menudo se informa directamente en ng/ml o Mg/L. Los médicos deben prestar atención a las diferencias causadas por los diferentes métodos de informe. Ventajas y desventajas de determinar la concentración de proteína enzimática mediante métodos inmunoquímicos y medición tradicional de la actividad enzimática. En comparación con otros métodos, el método inmunoquímico tiene las siguientes ventajas: ① Alta sensibilidad, que puede alcanzar niveles de ng/L a μg/L, y puede detectar cantidades pequeñas o traza de enzimas que son difíciles de detectar con otros métodos ② Alta especificidad y es casi inmune a No se ve afectado por otras sustancias en los fluidos corporales, como inhibidores y activadores de enzimas, y no interfiere con los medicamentos; Se puede utilizar para la determinación enzimática de ciertas proteínas enzimáticas que no muestran actividad enzimática, como varios zimógenos o apoproteínas, o debido a factores genéticos, mutan y sintetizan proteínas enzimáticas inactivas y proteínas enzimáticas inactivadas. ④ En algunos casos, combina la actividad enzimática. Las mediciones para calcular la actividad inmune específica pueden proporcionar más datos e información nuevos con aplicación clínica y valor de investigación. ⑤ Especial para la determinación de isoenzimas.

La determinación inmunoquímica de enzimas también tiene sus limitaciones, principalmente las siguientes. : ① A menudo es difícil preparar suficientes enzimas purificadas como antígenos y antisueros con propiedades inmunoquímicas y la carga de trabajo es alta. 2. Hay muchos pasos de medición y la operación es compleja. 3. El costo de la medición es alto. dominar la tecnología inmunoquímica, dominar las condiciones óptimas para la formación de complejos antígeno-anticuerpo y reducir continuamente los costos para garantizar la precisión de los resultados de las mediciones y hacerlos ampliamente utilizados en la práctica clínica.