Método de prueba de la prueba de Limulus
El ensayo de Limulus se divide en métodos:
Método del gel
Método de turbidez dinámica
Método de turbidez de punto final
Método cromogénico dinámico
Método cromogénico de punto final
El método del gel es un método para la detección cualitativa o semicuantitativa de endotoxinas basado en el principio de la reacción de aglutinación entre limulus reactivo y endotoxina. Las especificaciones comunes del reactivo de Limulus del método de gel son 0,1 ml/tubo o 0,5 ml/tubo o más. Cuando se usa, se debe agregar agua despirogenada (agua de prueba de endotoxinas bacterianas) para su reconstitución antes de su uso. El método del gel consiste en observar si se forma un gel como punto final de la reacción. Este método es relativamente simple y económico de operar, no requiere equipo de medición especial y puede usarse para determinaciones cualitativas o semicuantitativas.
Método de turbidez dinámica, método de turbidez de punto final, método cromogénico dinámico y método cromogénico de punto final, estos cuatro métodos son todos para la detección cuantitativa de endotoxinas.
De acuerdo con el principio de detección, tanto el método de turbidez de punto final como el método de turbidez dinámica pertenecen al método de turbidez. El método de turbidez es un método para determinar el contenido de endotoxina detectando el cambio de turbidez durante la reacción entre el reactivo de Limulus y la endotoxina. No existen productos comerciales para el método de turbidez de punto final. La turbidimetría dinámica (también conocida como turbidimetría dinámica) es un método para detectar el tiempo de reacción requerido para que la turbidez de una mezcla de reacción aumente mediante una absorbancia preestablecida, o un método para detectar la tasa de aumento de turbidez.
Tanto el método colorimétrico de punto final como el método colorimétrico dinámico son métodos de matriz cromogénica. El método de la matriz cromogénica es un método para medir el contenido de endotoxina utilizando la coagulasa producida durante la reacción entre el reactivo de Limulus y la endotoxina para hacer que el sustrato específico desarrolle color y libere el cromóforo para determinar la concentración de endotoxina. sobre el color del producto, también conocido como Colorimetría. Xiamen Limulus Reagent Factory lanzó un kit de reactivos de Limulus que utiliza tetrapéptido de Limulus como sustrato cromogénico en 2005. Tiene una fuerte capacidad antiinterferente, una sensibilidad de hasta 0,005 EU/ml y su calidad ha alcanzado el nivel líder internacional. Más de 500 unidades han utilizado este kit y algunas unidades han publicado la literatura correspondiente. Hay una pequeña cantidad de productos extranjeros en China, pero los precios son mucho más altos que los de los reactivos nacionales y el ciclo de entrega es largo.
Si solo necesita detectar el límite de endotoxinas de la muestra, puede elegir el reactivo de Limulus del método del gel. Al determinar el límite de endotoxinas y el factor de dilución efectivo máximo, realice una prueba de interferencia en la muestra para determinar. la calidad del reactivo de Limulus utilizado.
Si necesita determinar cuantitativamente el contenido de endotoxinas en una muestra, debe elegir un kit de reactivos de Limulus de matriz cromogénica o un reactivo de Limulus de turbidez dinámica.
El método de turbidez dinámica y el método cromogénico dinámico requieren un instrumento de fotometría dinámica con sistema de incubación y software de soporte, como el probador de lisados de microplacas ELx808 (o Thermo Scientific FC) y el software de soporte TALgent o Gen5. El método de turbidez dinámica y el método colorimétrico dinámico son simples, convenientes y se pueden realizar en un solo paso, con un amplio rango lineal.
El método cromogénico de punto final requiere un lector de microplacas o espectrofotómetro visible para su detección. Equipado con un lector de microplacas con un sistema de incubación, como la microplaca ELx808 (o Thermo Scientific FC), se puede reducir la cantidad de reactivos utilizados.