¿Cuáles son los métodos de detección de mutaciones genéticas más utilizados?
El principio básico de la secuenciación es el método de terminación didesoxi, que es un método confiable para detectar mutaciones genéticas y actualmente es el método más utilizado.
Sin embargo, su funcionamiento es engorroso, requiere mucho tiempo, tiene baja sensibilidad y es perjudicial para el medio ambiente y el operador, por lo que tiene ciertas limitaciones en la aplicación clínica.
La pirosecuenciación es adecuada para secuenciar secuencias cortas conocidas, y su reproducibilidad y precisión son comparables a la secuenciación de SangerDNA, mientras que su velocidad mejora considerablemente.
Los productos de tecnología de pirosecuenciación tienen la capacidad de secuenciar un gran número de muestras simultáneamente.
La tecnología de pirosecuenciación proporciona una plataforma ideal para la investigación y la detección clínica de polimorfismos de un solo nucleótido de alto rendimiento, bajo costo, oportuna, rápida e intuitiva.
2. Reacción en cadena de la polimerasa microdigital (MPCR)
Este método consiste en diluir y subdividir la muestra hasta que el número de moléculas a detectar en cada muestra subdividida no supere una, cada una. Luego se agregó la muestra subdividida en las mismas condiciones y se contó una por una en un chip genético.
Este método es un método cuantitativo absoluto.
3. Reacción en cadena de la polimerasa: tecnología de análisis de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es un método utilizado para amplificar fragmentos de ADN específicos. La tecnología de biología molecular puede considerarse especial. Replicación del ADN fuera de los organismos La característica más importante de la PCR es que puede aumentar considerablemente la cantidad de ADN en una pequeña cantidad de ADN.
Este método se utiliza generalmente para detectar sitios de mutación conocidos.
Por lo tanto, ya sean restos de criaturas antiguas en fósiles, personajes históricos o el cabello, la piel o la sangre que dejó el asesino hace décadas, siempre que se pueda aislar una pequeña cantidad de ADN, La amplificación y comparación se realizaron mediante PCR.
Este es el poder de la evidencia de rastreo.
Mullis de Estados Unidos propuso por primera vez esta idea en 1983. La invención de la reacción en cadena de la polimerasa en 1985, que es una simple amplificación del ADN, significó el verdadero nacimiento de la tecnología PCR.
Hoy, en 2013, la PCR ha evolucionado hacia su tecnología de tercera generación.
En 1976, el científico taiwanés Qian Jiayun descubrió la ADN polimerasa estable Taq, que también hizo una contribución fundamental al desarrollo de la tecnología de PCR.
La PCR utiliza el ADN para desnaturalizarlo en hebras individuales a 95 °C in vitro. A bajas temperaturas (normalmente alrededor de 60 °C), los cebadores se combinan con las cadenas individuales según el principio de emparejamiento de bases complementarias y luego. la temperatura se ajusta a la temperatura de reacción óptima de la ADN polimerasa (alrededor de 72°C).
La ADN polimerasa sintetiza hebras complementarias en dirección del fosfato al azúcar pentosa (5'-3').
El equipo de PCR basado en polimerasa es en realidad un dispositivo de control de temperatura que puede controlar bien la temperatura de desnaturalización, la temperatura de replicación y la temperatura de extensión.
4. Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)
Este método se basa en la detección de las diferencias entre el ADN bicatenario híbrido no coincidente y el ADN bicatenario homocigoto totalmente coincidente. revelar y detectar fragmentos heterodúplex que contienen sustituciones, inserciones o eliminaciones de bases únicas.
En comparación con los métodos de secuenciación, este método es simple y rápido, y puede usarse no solo para detectar mutaciones conocidas, sino también para buscar mutaciones desconocidas.
Sin embargo, solo puede verificar si hay una mutación, pero no puede detectar el tipo de mutación, y el juicio del resultado es propenso a errores.
5. Tecnología de análisis de polimorfismo conformacional monocatenario
Basado en el hecho de que el ADN monocatenario tiene su segunda conformación específica en un entorno no desnaturalizante, y la diferencia en la conformación conduce a diferentes movilidades electroforéticas, separando así la cadena normal y la cadena mutante.
Es más sensible que la secuenciación.