¿Cuántas células se deben esparcir en una placa de 6 pocillos para la transfección viral de células en suspensión?

1. 18-24 horas antes de la transfección lentiviral, extienda las células adherentes en una placa de 24 pocillos en una proporción de 1×10 ^5 células/bien superior. El número de células para la transfección lentiviral debe ser aproximadamente 2×10^5/pocillo.

2. Al día siguiente, reemplace el medio original con 2 ml de medio nuevo que contenga 6 μg/ml de polibreno y agregue una cantidad adecuada de suspensión de virus.

3. (Seleccione este paso para células sensibles a la toxicidad del polipireno) Después de 4 horas, agregue 2 ml de medio fresco para diluir el polipireno.

4. Continuar la incubación durante 24 horas, reemplazando el medio que contiene el virus por medio fresco.

5. Continuar cultivando. Si el lentivirus contiene una proteína fluorescente, la expresión fluorescente suele ser visible 48 horas después de la transfección y más pronunciada después de 72 horas. Si necesita utilizar FACS para comprobar la eficacia de la transfección, puede hacerlo entre 72 y 96 horas después de la transfección. Si el lentivirus contiene un gen de resistencia y es necesario detectarlo con medicamentos, el medicamento se puede agregar 3 a 4 días después de la transfección.