Cómo medir la clorofila a y cómo contar las cianobacterias

Si desea saber si habrá crecimiento excesivo de algas o brotes de algas verdiazules en una masa de agua cerrada, debe controlar la cantidad y calidad de las algas en la masa de agua, ya que la medición de algas y otros fitoplancton mediante métodos de conteo tiene un gran valor. Los errores y requieren mucho tiempo y trabajo, requieren una experiencia laboral relativamente alta de los inspectores. Alta, generalmente se puede medir el contenido de clorofila a de las algas en el agua. Cuando el contenido de clorofila a en el cuerpo de agua aumenta repentinamente y el cuerpo de agua contiene una gran cantidad de nitrógeno, fósforo y otros nutrientes, junto con factores como la luz solar intensa y el clima cálido, es muy fácil que las algas crezcan salvajemente en el Cuerpo de agua. Puede notificar a los departamentos pertinentes para que tomen contramedidas lo antes posible.

Dado que las algas son protoplastos sin embriones, autótrofos fotosintéticos y que contienen clorofila, el contenido de clorofila a en el fitoplancton representa aproximadamente del 1 al 2% de la materia orgánica, lo que es una mejor estimación del índice de biomasa de las algas. La correlación entre la cantidad de algas y el contenido de clorofila se puede determinar de antemano, y el contenido de clorofila a se utiliza para estimar la cantidad de algas. Es decir, midiendo la clorofila en el agua, se puede determinar rápidamente la cantidad aproximada de algas. comprendido.

Existen muchos instrumentos y métodos para medir la clorofila a. La determinación de clorofila a mediante espectrofotometría es un método sencillo y sencillo. Después de centrifugar, concentrar o filtrar la muestra de agua, moler, extraer con acetona y diluir a volumen, el sobrenadante se mide a 750 nm, 645 nm, 663 nm, 652 nm y otros. longitudes de onda. Valor de absorbancia y cálculo de clorofila a, clorofila b y contenido total de clorofila según fórmulas empíricas.

La determinación de clorofila a mediante espectrofotometría es ligeramente diferente a la determinación de otras sustancias. Por ejemplo, la determinación de fósforo sólo necesita medir el valor de absorbancia de una única longitud de onda, y luego sustituir el valor de absorbancia de. la curva de calibración medida con la solución estándar para el cálculo del contenido de fósforo. Para la clorofila a, no se puede utilizar la curva de calibración y se deben utilizar los valores de absorbancia de múltiples longitudes de onda para calcular el contenido de varios indicadores basándose en fórmulas empíricas. Debido a que los pigmentos del cloroplasto están compuestos de clorofila a, clorofila b y otras sustancias, y la solución de prueba es una solución mixta de múltiples componentes, es difícil e innecesario separar estos tipos de sustancias en la solución de prueba. La clorofila a se absorbe tanto a 645 nm como a 663 nm, con un coeficiente de absorción menor de 16,75 a 645 nm y un coeficiente de absorción mayor a 663 nm de 82,04. La clorofila b también se absorbe a 645 nm y 663 nm, pero el coeficiente de absorción a 645 nm es El coeficiente de absorción es mayor, 45,60, y el coeficiente de absorción a 663 nm es menor, 9,27. Se puede ver que el pico de absorción de clorofila a aparece a 663 nm y la curva de absorción se extiende hasta 645 nm. Por lo tanto, al calcular el contenido de clorofila a en, no es tan grande como el coeficiente de absorción a 663 nm. de la fórmula, es necesario restar la clorofila b. Luego se calculan los valores de absorción a 663 nm y 645 nm.

El método de análisis estándar requiere que el extracto de pigmento de cloroplasto no esté turbio y que la absorbancia se mida a 710 nm o 750 nm. El valor debe ser inferior al 5 % del valor de absorbancia de la clorofila a. pico, de lo contrario se deberá filtrar nuevamente. Suponiendo que el valor de absorbancia de la muestra a la longitud de onda de 663 nm es 0,03, el valor de absorbancia a la longitud de onda de 750 nm no debe ser superior a 0,0015. Se requiere que la claridad de la solución de prueba sea alta al medir 710 nm o 750 nm. para evitar la interferencia de sustancias suspendidas Generalmente, se mide el agua. La longitud de onda de la turbidez es de 680 nm para evitar la absorción de clorofila a a 680 nm, al medir la turbidez, para evitar la absorción de clorofila a a 680 nm, la longitud de onda. El tipo de medición de turbidez se selecciona por encima de 710 nm. En la fórmula de cálculo, cualquier cálculo que involucre valores de absorbancia debe restar el valor de absorbancia a 710 nm para restar la interferencia de las sustancias suspendidas.

El uso de espectrofotometría para medir el contenido de clorofila requiere una alta precisión de longitud de onda del instrumento de medición, el espectrofotómetro. Si la longitud de onda difiere de la longitud de onda del pico de absorción original en 1 nm, el error en la medición de la clorofila a es del 2% y la clorofila b es del 19%. La longitud de onda del espectrofotómetro debe calibrarse antes de su uso. Además de las instrucciones del instrumento, el método de calibración también debe calibrarse para clorofila a y b puras.