Cómo eliminar el Glucococcus aureus

Principio de detección de mejor respuesta: Los coliformes son un grupo de bacilos gramnegativos que pueden fermentar la lactosa, producir ácido y gas, son aeróbicos y facultativamente anaeróbicos y se derivan principalmente de heces humanas y animales. se utiliza como indicador de contaminación fecal para evaluar la calidad higiénica de los alimentos e inferir si existe posibilidad de contaminación de bacterias patógenas intestinales en los alimentos. El número de coliformes en los alimentos se expresa como el número más probable (MPN) de coliformes en 100 ml (g) de muestra. 2. Instrumentos, equipos y aparatos: 2.1 Incubadora a temperatura constante: 36±1℃. 2.2 Matraz Erlenmeyer de 1000ml, 1ml, pipeta de 10ml. 2.3 Aguja de vacunación. 2.4 Microscopio. 2.5 Limpiar la mesa de trabajo. 2.6 Portaobjetos de vidrio, lámparas de alcohol, bolas para limpieza de oídos y gradillas para tubos de ensayo. 2.7 Balanza: sensibilidad 0,01g. 2.8 Caldera de esterilización. 2.9 Se esterilizan placas de Petri (diámetro: 90 mm) y tubos de ensayo a 121°C durante 30 minutos. 2.10 Pinza para tubos de ensayo, lámpara de alcohol, cronómetro, portaobjetos 3. Medio de cultivo y reactivos: 3.1 Tubo de fermentación de sales biliares de lactosa: Preparar y esterilizar según instrucciones del fabricante. 3.2 Placa de agar eosina-melan: Preparar y esterilizar según las instrucciones del fabricante. 3.3 Tubo de fermentación de lactosa: Preparar y esterilizar según las instrucciones del fabricante. Solución de tinción de 3,4 gramos. 3.4.1 Solución de teñido de violeta cristal: Violeta cristal 1 g Etanol al 95 % 20 ml Solución acuosa de oxalato de amonio al 1 % 80 ml Disuelva el violeta cristal en etanol y luego mezcle con una solución de oxalato de amonio. 3.4.2 Solución de yodo de Gram: 1 g de yodo, 2 g de yoduro de potasio, 300 ml de agua destilada Primero mezcle el yodo y el yoduro de potasio, agregue un poco de agua destilada, agite bien y, después de la disolución completa, agregue agua destilada hasta 300 ml. 3.4.3 Solución de contratinción de Sahuang: Sahuang 0,25 g de etanol al 95 % 10 ml de agua destilada 90 ml Disolver Sahuang en etanol y luego diluir con agua destilada. 3.5 Solución salina fisiológica. 4. Procedimientos de inspección: Muestra de prueba ↓ Dilución ↓ Tubo de fermentación de sales biliares de lactosa, 36 ± 1 ℃, 24 ± 2 h ↓ ↓ Sin producción de gas y producción de gas ↓ ↓ Placa de agar eosina-melan negativo para coliformes, 36 ± 1 ℃, 24 ± 2 h ↓ Informe↓ ↓ Tubo de fermentación de lactosa teñido con Gram, 36±1℃, 24±2 horas ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ G+ G-, sin producción de gas por Bacillus ↓ ↓ Coliformes negativos Coliformes negativos↓ ↓ ↓ Informar un informe positivo de bacterias coliformes 5. Método de determinación: 5.1 Dilución de la muestra: 5.1.1 Coloque 25 ml (o 25 g) de la muestra en un vaso de plástico esterilizado que contenga 225 ml de solución salina fisiológica esterilizada mediante operación aséptica. Agite para formar una dilución uniforme de 1:10. 5.1.2 Utilice una pajita estéril de 1 ml para absorber 1 ml de la dilución 1:10, inyéctelo en un tubo de ensayo que contenga 9 ml de solución salina estéril y agite para formar una dilución 1:100. 5.1.3 Repita la operación de 5.1.2 para hacer una dilución 1:1000. 5.2 Prueba de fermentación de lactosa y sales biliares: De acuerdo con los requisitos de las normas de higiene alimentaria o la estimación de la contaminación de la muestra de prueba, seleccione dos diluciones e inocule 3 tubos en cada dilución. Si el volumen de inoculación es superior a 1 ml, utilice el doble. -Material de los tubos de fermentación de lactosa y sales biliares. Para 1 ml y menos, utilice tubos de fermentación de lactosa y sales biliares de un solo material. Luego colóquelo en una incubadora a 36 ± 1 ℃ e incúbelo durante 24 ± 2 horas. Si todos los tubos de fermentación de lactosa y sales biliares no producen gas, se puede informar como coliforme negativo, si hay producción de gas, se pueden realizar los siguientes procedimientos; seguido. 5.3 Aislamiento y cultivo: inocular los tubos de fermentación productores de gas en placas de agar eosina-melan, colocarlos en una incubadora a 36 ± 1 °C, sacarlos después de 24 horas de cultivo, observar la morfología de la colonia y realizar tinción de Gram. 5.4 Prueba de confirmación: En la placa anterior, seleccione de 1 a 2 colonias sospechosas de coliformes para la tinción de Gram e inocule el tubo de fermentación de lactosa, colóquelas en una incubadora a 36 ± 1 °C durante 24 ± 2 horas y observe la producción de gas. Si el tubo de fermentación de lactosa produce gas y la tinción de Gram es negativa para bacterias libres de bacilos, se puede informar como coliforme positiva. 5.5 Informe: Según la cantidad de tubos confirmados como positivos para coliformes, verifique la tabla de búsqueda de MPN e informe la cantidad más probable de coliformes por 100 ml (g). Métodos para detectar Staphylococcus aureus en los alimentos Staphylococcus aureus es una bacteria patógena importante que causa infecciones purulentas en humanos y animales, y también es una de las bacterias patógenas comunes que causan intoxicación alimentaria en humanos.

Esta bacteria está ampliamente distribuida en la naturaleza, como el aire, el suelo, el agua y otros ambientes. Esta bacteria se encuentra a menudo en las cavidades que conectan la piel de humanos y animales con el mundo exterior. Según los informes, la tasa de portadores de bacterias en personas normales puede alcanzar del 30% al 80%, de los cuales la tasa de portadores de bacterias en la piel es del 8 al 22%, y la tasa de portadores de bacterias en el tracto respiratorio superior, como la cavidad nasal y la garganta, es más del 40 al 50%, por lo que puede pasar a través de diversos La contaminación de los alimentos se produce a través de diversas formas y medios, especialmente a través de las manos de los trabajadores y el tracto respiratorio superior. Dado que el Staphylococcus aureus patógeno puede producir enterotoxina, una vez que las bacterias contaminan los alimentos y en un ambiente de temperatura adecuada, las bacterias pueden multiplicarse y producir enterotoxinas, causando así intoxicación alimentaria en los consumidores. La intoxicación alimentaria causada por Staphylococcus aureus es extremadamente común en países de todo el mundo. Especialmente en regiones como América del Norte y Europa, la tasa de incidencia es mayor. En los países mencionados anteriormente, hay casos de intoxicación alimentaria causada por Staphylococcus aureus cada año, solo superados por Salmonella, y los casos de intoxicación alimentaria bacteriana ocupan el segundo y tercer lugar. El envenenamiento causado por Staphylococcus aureus también se reporta de vez en cuando en mi país. Por lo tanto, países de todo el mundo ahora incluyen Staphylococcus aureus como un elemento de prueba legal para la higiene de los alimentos. El método actual utilizado en mi país para tratar Staphylococcus aureus se basa en la norma nacional GB.4789-10-84 y la norma industrial del sistema de inspección y cuarentena SN.0172-92. Todo el proceso de prueba tarda aproximadamente 5 días para obtener los resultados finales, lo que requiere mucho tiempo y mano de obra, crea una acumulación de mercancías, afecta el envío oportuno de las mercancías, aumenta los costos de almacenamiento del propietario y causa grandes pérdidas económicas. A lo largo de los años, muchos laboratorios de microbiología de alimentos han estado explorando y buscando algunos métodos de detección rápidos y altamente precisos. Recientemente, hemos obtenido dos métodos de detección rápida para Staphylococcus aureus patógeno de 3M Company en los Estados Unidos y bioMérieux Base, su nombre. es: ① La placa de recuento Petrifilm RSA (desarrollada y producida por 3M Company de los Estados Unidos) es una placa de recuento de película delgada para la detección rápida de Staphylococcus aureus. ② Agar Baird-parker + RPF (Placa de detección y recuento de Staphylococcus aureus desarrollada y producida por la empresa francesa bioMérieux utilizando agar Baird-Parker más plasma libre de fibrinógeno). Principio: Petrifilm RSA. La película de prueba se compone de dos partes. La primera parte está compuesta por tabletas de medio Staphylococcus aureus. Este medio contiene Barid-Parker modificado, nutrientes más coloide soluble en agua fría. La segunda parte es una tableta de reacción de nucleasa termoestable (TNasa), que contiene ADN, azul de toluidina - O e indicador de tetraeolio. Este indicador ayuda a contar colonias y determinar la presencia de nucleasa termoestable estafilocócica. El ADN desoxirribonucleico resistente al calor (desoxirribonucleico ADNasa) es una característica típica del Staphylococcus aureus productor de toxinas. Esta enzima es muy resistente al calor y no pierde actividad fácilmente cuando se calienta a 100 °C durante 30 minutos. A 130 °C, su D. El valor es de 16,6 minutos. Este es el peso molecular de la enzima es 16800, el punto isoeléctrico PH es 9,6 y la enzima de ADN resistente al calor es similar a la detección de coagulasa plasmática. Es un método para identificar Staphylococcus aureus. En la pieza de prueba Petrifilm RSA, se puede ver que la reacción de la enzima ADN resistente al calor se eleva y aparece como un anillo rosa que rodea una colonia roja o azul. La hoja de detección Petrifilm.RSA se debe usar junto con la hoja de reacción de nucleasa resistente al calor Peyrifilm. Si se usa sola, no mostrará colonias porque el indicador con un recuento auxiliar de colonias está en la hoja de reacción, no en la hoja de detección Petrifilm.RSA. Agar Baird-parker + RPF, este medio es rico en nutrientes. Se utiliza cloruro de litio en lugar de telurito de potasio para hacer que la colonia se coloree negra. El RPF se complementa con plasma de conejo y fibrinógeno bovino para detectar la actividad de la coagulasa. todo o parte del halo de fibrina precipitado alrededor de las colonias positivas para coagulasa. Por lo tanto, siempre que haya Staphylococcus aureus positivo para coagulasa en plasma, aparecerán colonias negras con halos en el medio de cultivo. Confirme y cuente.

Materiales y métodos de implementación experimental: Este experimento utilizó los siguientes tres reactivos: 1. Petrifilm Rapid. Placa de recuento de S. aureus proporcionada por 3M Company de los Estados Unidos. 2. Agar Baird-Parker + RPF proporcionado por la francesa Bio-Merieux. 3 El laboratorio prepara agar Baird-Park (Oxoid, Reino Unido) y plasma fresco de conejo. Las cepas eran de America TyP Culture Collection. Las 10 cepas de Staphylococcus aureus, sus números bacterianos son: ATCC 27661 ATCC 27664 ATCC 13565 ATCC 51704 ATCC(K) 12600 ATCC(R) 65389 ATCC 25923 ATCC 29213 ATCC 8095 ATCC 12598 cepas no Staphylococcus aureus 5 , su número de bacterias es : ATCC 51813 (E. coli), ATCC 624 (Streptococcus agalactiae), ATCC 51816 (Enterobacter cloacae), ATCC 6051 (Bacillus subtilis), ATCC 49214 (Salmonella Enteritidis), Inspección de alimentos naturales Así, cómprelo en el mercado a voluntad . En este experimento, la misma muestra de prueba se homogeneizó y se diluyó en incrementos de 10 veces con solución salina fisiológica estéril, y luego se tomaron de 1 a 2 diluciones para inocular los tres medios de cultivo anteriores al mismo tiempo para experimentos paralelos. fueron comparados entre sí. Los métodos de inoculación de los tres medios anteriores se operan de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por el fabricante. Además, el medio Baird-Parker Agar se opera de acuerdo con el estándar SN0172-92. R. Este experimento probó ***15 cepas de cepas estándar conocidas, incluidas 10 cepas de Staphylococcus aureus y 5 cepas de otras cepas (incluidas Escherichia coli, Enterobacter cloacae, Salmonella Enteritidis, Bacillus subtilis y Streptococcus agalactiae). B. Pruebe 101 muestras de alimentos naturales (incluidas 11 carnes, 14 carnes, 17 productos acuáticos, 25 leche, 22 verduras y 12 productos de soja). Resultados: A. De las 10 cepas analizadas, se encontró que Staphylococcus aureus creció bien en los tres medios. Para la misma dilución de la solución bacteriana, excepto por unas pocas cepas, los resultados de recuento y detección en los tres medios fueron básicamente los mismos. En términos de orden de magnitud, no hay diferencias significativas. Sin embargo, las cinco cepas distintas de Staphylococcus aureus no pudieron crecer en los tres medios. B. Se inocularon 101 muestras de alimentos naturales. Cada muestra fue inoculada con tres medios de cultivo a la misma concentración de dilución. Finalmente, se detectaron 45 Staphylococcus aureus, lo que representa el 44,5% de todas las muestras. Entre ellas, Petrifilm RSA detectó 42 resultados positivos. 93,3% de todas las muestras positivas, y Baird-Parker+RPF Agar detectó 26 resultados positivos, lo que representa el 57,7% de todas las muestras positivas. Baird-Parker Agar detectó 32 resultados positivos, lo que representa el 71,1% de todas las muestras positivas. Discusión 1. Se probaron 15 cepas de bacterias estándar en 3 medios de cultivo. Se inocularon 10 cepas de Staphylococcus aureus a la misma concentración. Los resultados mostraron un buen crecimiento. Los recuentos finales fueron básicamente consistentes y se ubicaron en el mismo orden de magnitud. de no Staphylococcus aureus se inocularon en la misma concentración. Ninguno de los tres medios de cultivo anteriores creció cuando se inoculó, lo que indica que los tres medios de cultivo anteriores fueron buenos para seleccionar Staphylococcus aureus. 2. Inocular 101 muestras naturales con la misma dilución homogénea e inocular tres medios de cultivo al mismo tiempo. A partir del resultado final, la tasa de detección positiva de Staphylococcus aureus es del 44,5%. De los procedimientos de detección del próximo año, Petrifilm. RSA y Agar Baird-Parker + RPF Los resultados se observan de 28 a 30 horas después de inocular la muestra, y no es necesario realizar una prueba confirmatoria. Si se utiliza Agar Baird-Parker para realizar la prueba, se debe observar la placa. 48 horas después de la inoculación, las colonias sospechosas deben recogerse y transferirse al nutriente. En caldo, realice una prueba de coagulasa plasmática o de ADNasa resistente al calor después de 18 a 24 horas para confirmar, y el recuento final tardará aproximadamente 80 horas.

4. De esta prueba se observa que los tres medios de cultivo anteriores se utilizan para contar y detectar directamente el contenido de Staphylococcus aureus en los alimentos. El contenido del inóculo de muestra debe controlarse dentro de 100 células/ml, lo que es relativamente fácil de distinguir. y contar, como si la carga bacteriana está demasiado concentrada, afectará la lectura final. Por lo tanto, si la muestra recién enviada no tiene conocimiento de la contaminación, generalmente es necesario hacer más de 2 diluciones e inocularlas por separado al mismo tiempo. mismo tiempo para obtener un resultado más satisfactorio. Al inocular Agar Baird-Parker+RPF y Agar Baird-Parker, se debe esparcir 1 ml de solución de muestra en tres placas (0,3, 0,3, 0,4 ml. Esto provocará procedimientos engorrosos y consumirá una gran cantidad de reactivos, pero Baird-Parker). Parker.RPF El medio de cultivo también se puede verter en 1 ml de líquido de muestra para realizar el recuento. 5. Durante todo el proceso de prueba, encontramos que según las instrucciones de uso de Petrifilm RSA y Barid-Parker + RPF, la operación estipula que los resultados deben observarse 24 horas después de la inoculación. Las colonias suelen ser más pequeñas y las características no son obvias, pero si la colonia de uvas continúa dejándose durante la noche, las características de las colonias serán obvias y el número de observaciones puede aumentar el primer día, lo que puede mejorar la credibilidad. los resultados de la prueba. 6. Dado que aún no hemos obtenido cotizaciones de los proveedores durante el período de prueba para los dos medios anteriores, no podemos estimar el costo de las pruebas de cada muestra. Sin embargo, se puede esperar que el costo de los consumibles para los medios de detección rápida antes mencionados para ambas especies sea mayor que el costo del método clásico convencional (Agar Baird-Parker). 7. A través de este experimento, sentimos que se detectó Staphylococcus aureus utilizando el medio Petrifilm Plate producido por 3M Company en los Estados Unidos y el medio Baird-Parker RPF producido por la francesa Bio-Mérieux. El tiempo se puede reducir a la mitad en comparación con los métodos de detección convencionales actuales. Y obviamente puede ahorrar mucha mano de obra. Esto cumple plenamente con los requisitos para pruebas de laboratorio rápidas, especialmente en condiciones de laboratorio relativamente simples a nivel de base, y muestra sus ventajas de facilidad de uso. 4