¿Usar células lisadas para medir la rosa de bengala intracelular?
Usamos el kit de Biyuntian y el polvo DCFH-DA de SIGMA para hacer el mismo experimento. La fluorescencia de Biyuntian fue muy débil y no hubo diferencias entre los grupos. Usamos el polvo de SIGMA para preparar la solución DCFH-DA nosotros mismos. Los resultados salieron todos a la vez. A veces lo más barato sale más caro.
Se recomienda comprar el polvo DCFH-DA de SIGMA en conjunto, ya que una sola persona no puede usarlo todo.
Tome una cantidad adecuada (suficiente para su propio experimento) y disuélvala directamente en un medio sin suero sin ningún tratamiento con disolventes. La solubilidad es muy buena. Se puede almacenar a corto plazo a 4 grados.
En mis experimentos, estimulé las células durante un tiempo prolongado (10 horas), por lo que cargué la sonda solo después de la intervención, con una concentración final de 10uM o 20uM. Cargar directamente en estado adherente, incubar en la oscuridad durante 30 minutos, lavar dos veces con PBS, digerir en suspensión y detectar en un citómetro de flujo. La intensidad de la fluorescencia es directamente proporcional a los niveles de especies reactivas de oxígeno intracelulares.