Principio de detección por citometría de flujo
El principio de detección de la citometría de flujo es el siguiente:
El citómetro de flujo es un dispositivo que analiza y clasifica las células automáticamente. Mide, almacena y muestra rápidamente una variedad de parámetros biofísicos y bioquímicos importantes que caracterizan las células dispersas suspendidas en líquido, clasificando subpoblaciones de células específicas dentro de ellas en función de rangos de parámetros preseleccionados. La mayoría de los citómetros de flujo son instrumentos de resolución cero que sólo pueden medir el ácido nucleico total, la proteína total y otros indicadores de una sola célula.
Las células teñidas con fluorescencia especial deben excitarse mediante una fuente de luz adecuada para emitir fluorescencia para su recolección y detección. Las fuentes de luz más utilizadas son las lámparas de arco y los láseres; los láseres y los láseres de iones de argón son comunes, pero también existen láseres de iones de criptón o láseres de tinte. La elección de la fuente de luz depende principalmente del espectro de excitación del material excitado. La lámpara de mercurio es la lámpara de arco más utilizada. La mayor parte de su espectro de emisión se concentra entre 300 y 400 nm, lo que es muy adecuado para ocasiones que requieren excitación con luz ultravioleta.
Principio de clasificación de muestras.
La función de clasificación del citómetro de flujo la completa el clasificador de células. El proceso general es: la columna de líquido expulsada de la boquilla se divide en una serie de pequeñas gotas. El circuito lógico determina si se clasifican según los parámetros seleccionados, y luego el circuito de carga carga las gotas de células seleccionadas que transportan las células. son desviados por un campo electrostático y caen en un colector; otros líquidos son aspirados como desechos y algunos tipos de instrumentos utilizan tubos de captura para clasificarlos;
El voltaje de carga es generalmente de +150 V o -150 V; la diferencia de potencial entre las placas de desviación es de varios miles de voltios. El generador de impulsos de carga en el circuito de carga está controlado por un circuito lógico, por lo que generalmente se requiere un tiempo de retraso de decenas de milisegundos desde la determinación de parámetros hasta la selección lógica y la carga por impulsos.