Preguntas y respuestas frecuentes sobre péptidos (Parte 1) Llena de información útil
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¿Cómo deben ser los péptidos? manipulado y almacenado?
Los péptidos liofilizados en polvo se pueden transportar de forma estable en paquetes sellados a temperatura ambiente, mientras que los péptidos disueltos no son adecuados para un almacenamiento a largo plazo.
Guía de almacenamiento de péptidos Ontolax: Los péptidos que requieren almacenamiento a largo plazo deben almacenarse en forma de polvo liofilizado en un recipiente sellado con desecante. La temperatura de almacenamiento es preferiblemente de -20°C o -80°C. Minimizar la degradación de péptidos. Este método de almacenamiento permite almacenar los péptidos durante varios años, evitando la degradación y oxidación bacteriana, así como la formación de estructuras secundarias.
Desembalaje: Deje que los péptidos se equilibren a temperatura ambiente en un desecador antes de desembalarlos y pesarlos. Dado que los péptidos son higroscópicos, los péptidos que no se han equilibrado a temperatura ambiente son propensos a condensarse cuando se abre la tapa, reduciendo así la estabilidad del producto peptídico.
Pesar: Pese rápidamente los péptidos deseados y almacene los péptidos restantes a -20°C o menos. Los péptidos que contienen el extremo N de cisteína, metionina, triptófano, asparagina, glutamina y glutamato tienen una vida útil más corta que otros péptidos.
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¿Cómo disolver los péptidos?
La solubilidad de los péptidos producidos por Ontolax depende principalmente de la polaridad del péptido. Las proteínas ácidas son solubles en soluciones alcalinas, mientras que las proteínas básicas son solubles en soluciones ácidas. Los péptidos hidrófobos y neutros que contienen una gran cantidad de residuos de aminoácidos polares no cargados o aminoácidos hidrófobos se pueden disolver en pequeñas cantidades de disolventes orgánicos como dimetilsulfóxido, DMF, ácido acético, acetonitrilo, metanol, propanol o isopropanol, y luego diluir con agua ( agua destilada). Los péptidos que contienen metionina o cisteína no deben solubilizarse con DMSO porque el DMSO puede causar oxidación de la cadena lateral.
Test de disolución de péptidos: Antes de disolver el péptido, tomar una pequeña porción y realizar una prueba de disolución de péptidos, probando varios disolventes diferentes hasta encontrar el más adecuado. La sonicación ayuda a romper las partículas y aumenta la solubilidad. (Nota: el ultrasonido puede provocar el calentamiento de la solución y la degradación de los péptidos).
Asigne un valor de -1 a cada aminoácido ácido (incluido el ácido aspártico (D), ácido glutámico (E) y -COOH carboxilo terminal a cada aminoácido básico (incluida la arginina (R), a la lisina (K), la histidina (H) y el amino terminal -NH2) se les asigna un valor de +1; luego se calcula la carga de todo el polipéptido.
Si la carga de todo el péptido es positiva, el péptido es básico. Primero intente disolverlo en agua destilada; si no es soluble en agua, intente disolverlo en una pequeña cantidad de ácido acético al 10% -25%. Si aún no funciona, agregue algunos ácidos grasos trans (10-. 50 microlitros) para hacerlo se disuelve y luego se diluye con agua hasta la concentración deseada.
Si todo el péptido está cargado negativamente, el péptido es ácido. Se puede intentar disolver los péptidos ácidos en PBS (pH 7,4). Si no se pueden disolver, se puede añadir una pequeña cantidad de disolvente alcalino, como bicarbonato de amonio 0,1 M, y luego diluir con agua hasta la concentración deseada. Los péptidos que contienen cisteína libre deben solubilizarse en tampones ácidos desgasificados porque los grupos sulfhidrilo se oxidan rápidamente a disulfuros a valores de pH superiores a 7.
Un péptido es neutro si la carga de todo el péptido es cero. Los péptidos neutros suelen ser solubles en disolventes orgánicos. Como primer paso, Ontolex recomienda intentar añadir una pequeña cantidad de acetonitrilo, metanol o alcohol isopropílico. Para péptidos altamente hidrófobos, disuélvalos en una pequeña cantidad de dimetilsulfóxido y luego dilúyalos con agua hasta la concentración deseada. Para los péptidos que contienen cisteína libre, es necesario utilizar DMF en lugar de DMSO; para los péptidos con tendencia a agregarse, se puede agregar clorhidrato de guanidina 6 M o urea 8 M y luego realizar la dilución necesaria.
Para prevenir o minimizar la degradación de los péptidos, el polvo de péptido liofilizado debe almacenarse a -20°C, preferiblemente a -80°C. Si necesita almacenar péptidos en solución, es mejor almacenarlos en pequeñas alícuotas para evitar la congelación y descongelación repetidas. Las muestras no utilizadas después de la descongelación deben desecharse. Los péptidos en solución a veces sufren degradación bacteriana, por lo tanto, disuelva el péptido en agua esterilizada o filtre la solución de péptidos para eliminar las bacterias.
Aminoácidos básicos: K, R, H, N-terminal
Aminoácidos ácidos: D, E, C-terminal
Aminoácidos básicos: K Ensayos clínicos , R, H, N-terminal
API (ingrediente farmacéutico activo)
Industria
Estudios de cristalografía de rayos X
Otros Ensayos Sensibles: Enzima-Sustrato, Interacciones Receptor-ligando, Ensayos de Bloqueo y Competición
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¿Qué es la pureza de los péptidos?
La pureza del péptido se refiere al contenido del péptido objetivo detectado mediante cromatografía líquida de alta resolución a una longitud de onda de 214 nanómetros (214 nanómetros es la longitud de onda de absorción de la cadena peptídica que el espectrofotómetro UV no puede detectar agua). y sal residual. Otras impurezas que se pueden detectar incluyen: secuencias eliminadas (faltan uno o más residuos de aminoácidos en la secuencia objetivo), secuencias truncadas (secuencias producidas durante el proceso de protección) y secuencias de desprotección incompletas (durante todo el proceso de síntesis o escisión final). . producir).
La purificación de péptidos no implica agua ni sal. La purificación por HPLC produce pequeñas cantidades de ácidos grasos trans, como aminoácidos terminales libres y otras cadenas laterales (por ejemplo, Arg, Lys, His) que producen pequeñas cantidades de impurezas de ácidos grasos trans. Los péptidos proporcionados por Ontolax a menudo contienen trazas de ácidos grasos trans y agua residual. Incluso en el estado liofilizado, estarán presentes diversos grados de humedad dependiendo de la capacidad de unión de valencia.
Las impurezas contenidas en los polipéptidos prepurificados incluyen polipéptidos y sustancias no polipeptídicas, mientras que las impurezas contenidas en los polipéptidos purificados, excepto las sales de ácidos grasos trans, son en su mayoría polipéptidos con secuencias modificadas.
Una secuencia objetivo que carece de uno o más residuos de aminoácidos
Una operación de limitación para evitar eliminaciones, es decir, se genera una secuencia truncada durante el proceso de limitación
Generado durante la síntesis o durante la escisión final
Los grupos protectores se unen al resto del polipéptido
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¿Qué es el péptido? ¿Contenido neto?
El contenido neto de un péptido es diferente de la pureza del péptido. El contenido neto de péptidos es la cantidad de péptidos en comparación con el material no peptídico (principalmente contraiones y agua). El contenido neto de péptidos puede determinarse mediante análisis de aminoácidos. Normalmente, los péptidos hidrófilos absorberán trazas de agua incluso en un estado estrictamente liofilizado. El contenido neto de péptidos también variará de un lote a otro debido a las diferencias en los procesos de purificación y liofilización.
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¿Cómo se sintetizan los péptidos?
A diferencia de la síntesis de proteínas naturales, la dirección de la síntesis de péptidos es del extremo C al extremo N. La síntesis de péptidos de Ontolace se basa en el método de síntesis de péptidos Fmoc o t-Boc en la plataforma tecnológica PeptideSyn. El proceso de síntesis específico incluye los siguientes ciclos: ① Desprotección: use piperidina para eliminar el grupo protector amino en la columna de protección Fmoc y el monómero. Activación y reticulación: utilice un activador para activar el grupo carboxilo del siguiente aminoácido. El monómero activado reacciona con el grupo amino libre y se entrecruza para formar enlaces peptídicos. (iii) Ciclo: Estos dos pasos de reacción se ciclan repetidamente hasta que se completa la síntesis. Luego, el péptido sintetizado se escinde de la resina y se desprotege. Finalmente se realiza precipitación, elución y liofilización.
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¿Qué forma de sal debo utilizar?
Los péptidos suelen presentarse como sales de ácidos grasos trans. Si los ácidos grasos trans residuales son un problema para sus experimentos, le recomendamos utilizar otras formas de sal como acetato y clorhidrato. Estas sales suelen ser entre un 20 y un 30 % más caras que las sales de grasas trans normales porque los péptidos se pierden durante la conversión de la sal y se requieren más materias primas.
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¿Cómo comprobar la calidad de los péptidos sintéticos?
Mantenemos todos los materiales proporcionados por nuestros clientes estrictamente confidenciales. Ontolax enviará el producto, junto con los resultados de las pruebas de HPLC y MS, de forma gratuita. Todos los péptidos de la empresa se purifican mediante cromatografía de fase reversa. El peso molecular del péptido se determinó mediante espectrometría de masas para confirmar la autenticidad del producto, que también reveló la mayoría de las impurezas principales. Si es necesario, también se pueden realizar pruebas del contenido neto de péptidos, como análisis de aminoácidos o análisis elemental. Estos métodos pueden confirmar la composición de aminoácidos de los péptidos y pueden usarse como métodos complementarios para la confirmación de péptidos. Todos los péptidos entregados cumplen con los requisitos de pureza del cliente. Se descartarán los péptidos que no cumplan los requisitos de pureza. Por supuesto, también podemos enviarlo a los clientes según sus requisitos.
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¿La empresa brinda servicios de envasado de péptidos sintéticos?
A petición del cliente, Ontolax podrá dividir algunos o todos los pedidos en porciones más pequeñas de forma gratuita. Debido a que las porciones pequeñas pueden evitar la congelación y descongelación repetidas, reduzca la cantidad de aperturas y cierres de contenedores, reduzca la posibilidad de mal manejo o contaminación bacteriana y haga que sus péptidos sean más estables.
Todos son bienvenidos a hacer preguntas y seguirnos. Si tiene alguna pregunta o pregunta, ¡no dude en contactarnos en cualquier momento!