Detección de E. coli
Es NMP/100g.
¿MPN/100g? significa el número de coliformes por 100g, y la unidad de coliformes es MPN.
MPN significa número más?probable?, el número más posible.
Los coliformes se refieren a un grupo de bacterias Gram-negativas no formadoras de esporas que pueden fermentar lactosa, producir ácido y gas, son aeróbicas y facultativamente anaeróbicas. Si se detectan bacterias coliformes en los alimentos, significa que los alimentos han sido contaminados con heces. Los resultados se informan como el número más cercano de coliformes (MPN) por 100 ml (g) de muestra.
Información ampliada
Pasos de la prueba
1 Muestreo y dilución
(1) Según el método de operación aséptica, 25 g de la prueba. muestra (o 25 ml) en un matraz Erlenmeyer que contenga 225 ml de agua esterilizada (hay una cantidad adecuada de perlas de vidrio preestablecidas en la botella) o en un mortero esterilizado, y agite o muela bien para obtener una dilución uniforme de 1:10. Es mejor utilizar un homogeneizador estéril para muestras de prueba sólidas y centrifugar a una velocidad de 8000 a 10000 r/min durante 1 minuto para realizar una dilución de 1:10.
(2) Utilice una pajita estéril de 1 ml para absorber 1 ml de la dilución 1:10, inyéctelo en un tubo de ensayo que contenga 9 ml de agua esterilizada, agite y mezcle para obtener una dilución 1:100, reemplace con 1 Tome una pipeta esterilizada de 1 ml y realice diluciones en serie de 10 veces según las operaciones anteriores.
(3) En función de los requisitos higiénicos del alimento o de la estimación de la contaminación de la muestra problema, seleccionar tres diluciones e inocular 3 tubos por cada dilución. Las muestras también se pueden utilizar directamente para la inoculación.
2. Prueba de fermentación primaria de la lactosa
Comúnmente se la denomina prueba hipotética. El objetivo es comprobar si la muestra contiene bacterias que fermentan la lactosa y producen gases. Inocular la muestra a analizar en el tubo de fermentación de sales biliares de lactosa. Si el volumen de inoculación es superior a 1 ml, utilice un tubo de fermentación de sales biliares de lactosa doble; si el volumen de inóculo es inferior a 1 ml, utilice un tubo de fermentación de sales biliares de lactosa simple; . Inocular 3 tubos por cada dilución, colocarlos en una incubadora a 36±1°C e incubar durante 24±2 horas. Si todos los tubos de fermentación de lactosa y sales biliares no producen gas, se pueden reportar como coliformes negativos. gas y luego siga el procedimiento siguiente.
3. Cultivo de aislamiento
Inocular los tubos de fermentación productores de gas en placas de agar eosina azul de metileno y cultivarlos en una incubadora a 36 ± 1 °C durante 18 a 24 horas. morfología de la colonia y realizar tinción de Gram, examen microscópico y prueba de refermentación.
4. Prueba de fermentación secundaria de lactosa
Comúnmente se la conoce como prueba de confirmación. Su finalidad es comprobar que las bacterias Gram negativas aisladas de los tubos de ensayo dieron positivo. La reacción en la prueba de fermentación primaria de la lactosa es que Bacillus puede fermentar la lactosa para producir gas. En el medio EMB selectivo mencionado anteriormente, seleccione de 1 a 2 colonias sospechosas de coliformes para la tinción de Gram, inocule el tubo de fermentación de lactosa al mismo tiempo, colóquelo en una incubadora a 36 ± 1 °C durante 24 ± 2 horas y observe el gas. producción. . Si el tubo de fermentación de lactosa produce gas y la tinción de Gram es negativa para bacterias libres de Bacillus, se reporta como coliforme positiva; si el tubo de fermentación de lactosa no produce gas o la tinción de Gram es positiva, se reporta como coliforme negativa;
Enciclopedia Baidu-Detección de E. coli