Cómo realizar el control de calidad del ARN
Cuantificación: Nano/espectrofotómetro (utilizado para detectar la concentración de ácido nucleico, la proporción de proteína a ácido nucleico y si la muestra contiene contaminantes como materia orgánica/ iones de sal, etc.). Registre la concentración de la muestra y los valores de absorbancia de 230, 260 y 280. Este método no evalúa la integridad del ARN.
● Concentración: La concentración óptima es 100-150 ng/ml. Si la concentración es inferior a esto, la concentración de ARN se puede aumentar utilizando el sistema PreAMP o métodos de concentración. La concentración de la muestra se puede lograr reduciendo el volumen de elución utilizando columnas de filtro QIAGEN. Para obtener ayuda con la concentración de la muestra, llame a la línea directa de servicio al cliente de QIAGEN al 400-880-0325.
● Relación 260/280: Esta relación refleja la relación entre la concentración de ARN y la concentración de proteína. La proporción ideal debe ser de 1,8 a 2,0; una proporción inferior a 1,8 indica la presencia de proteínas u otra contaminación.
● Proporción 260/230: esta proporción refleja la proporción entre la concentración de ARN y la contaminación del extracto ***. La proporción ideal debería ser 1,8-2,2. Una proporción inferior a 1,8 indica la presencia de materia orgánica/iones de sal u otros contaminantes. Estos contaminantes pueden afectar reacciones qPCR posteriores.
Detección de integridad del ARN: Analiza la integridad del ARN mediante electroforesis en gel o bioanalizador para garantizar la calidad del ARN y prevenir el impacto de la degradación del ARN en experimentos posteriores. Los estándares generales para la integridad del ARN son los siguientes:
● Relación 28S/18S: gt; 1,5 es de alta calidad, 1,3-1,5 es apenas utilizable, lt; 1,3 es de mala calidad.
● Número de integridad del ARN (RIN): gt; 7 es de alta calidad, 6-7 es apenas utilizable, lt; 6 es de mala calidad.