Amplificación genética de aplicaciones experimentales de amplificación genética

Los laboratorios de PCR no tienen requisitos estrictos de purificación, pero para evitar la posibilidad de contaminación cruzada entre áreas experimentales, es aconsejable adoptar un método de organización del flujo de aire de suministro y escape completo. Al mismo tiempo, la relación de suministro y escape de aire debe controlarse estrictamente para garantizar los requisitos de presión de cada área experimental.

3.1 Área de preparación y almacenamiento de reactivos

Las principales operaciones del área experimental son almacenar reactivos, preparar reactivos y preparar la mezcla de reacción principal. Los reactivos y materiales utilizados para la preparación de muestras deben transportarse directamente a esta área y no a través de otras áreas. Las materias primas de los reactivos deben almacenarse en esta área y los reactivos almacenados necesarios deben formularse en esta área. No existen requisitos estrictos para el control de la presión del flujo de aire en esta área.

3.2 Área de preparación de muestras

Las principales operaciones de esta área son preservar muestras clínicas, extraer ácidos nucleicos (ARN, ADN), almacenar y agregar tubos de reacción de amplificación y sintetizar ARN para medición del ADNc. El gradiente de presión en esta área debe ser positivo en comparación con las áreas adyacentes para evitar que la contaminación por aerosoles de áreas adyacentes ingrese a esta área. Además, se deben evitar movimientos innecesarios en esta área ya que puede ocurrir contaminación inducida por aerosoles durante la operación de adición.

3.3 Área de preparación y amplificación de la mezcla de reacción de amplificación

La operación principal de esta área es la amplificación de ADN o ADNc. Además, también se pueden realizar en esta zona. En los ensayos de PCR anidada, el tubo de reacción normalmente debe abrirse después de la primera ronda de amplificación, por lo que el riesgo de contaminación de la amplificación anidada es mayor y la segunda adición de la muestra debe realizarse dentro de esta área. El gradiente de presión en esta área debe ser negativo en relación con las áreas adyacentes para evitar fugas de aerosoles desde esta área. Para evitar la contaminación por aerosoles, se deben minimizar los movimientos innecesarios dentro del área. Las operaciones individuales, como el muestreo, deben realizarse en un banco de trabajo limpio.

3.4 Área de análisis de productos de amplificación

La principal operación de esta área es la medición de los fragmentos amplificados. Si se utiliza un analizador cerrado completamente automático para la detección, no es necesario configurar esta área. Esta área es la fuente más importante de contaminación de los productos de amplificación, por lo que se requiere que el gradiente de presión en esta área sea negativo en relación con las áreas adyacentes para evitar que los productos de amplificación se propaguen desde esta área a otras áreas. Cómo evitar la contaminación es una cuestión central en el diseño de laboratorios de PCR. En la práctica, las contaminaciones comunes incluyen las siguientes: contaminación del producto de amplificación, contaminación del ADN genómico natural, contaminación de reactivos y contaminación de muestra a muestra. Una vez que se produce la contaminación, el experimento debe detenerse hasta que se encuentre la fuente de la contaminación, los resultados experimentales deben invalidarse y el experimento debe repetirse. Por lo tanto, buscar la fuente de contaminación en el laboratorio después de que se produce la contaminación no solo requiere mucho tiempo y mano de obra, sino también un desperdicio de mano de obra y recursos materiales. Por lo tanto, para evitar la contaminación, primero debemos centrarnos en la prevención, no en la eliminación.

4.1 Dividir estrictamente las áreas de trabajo

1) Cada área experimental debe estar configurada de manera razonable

2) Cada área experimental debe tener señales obvias (como ojos; -captar números de casas o diferentes colores de piso, etc.) para evitar confusión de instrumentos, reactivos y otros equipos en diferentes áreas experimentales.

4.2 Configuraciones razonables del sistema

1) Configuraciones razonables del sistema de aire acondicionado y ventilación, intente utilizar un sistema de aire acondicionado completo;

2) Presión de flujo de aire estricta El control garantiza diferentes requisitos de presión en diferentes áreas experimentales.

4.3 Operaciones estandarizadas

(1) Los técnicos de laboratorio de pruebas de amplificación genética clínica deben recibir capacitación en el trabajo y pueden participar en pruebas de amplificación genética clínica solo después de aprobar la capacitación;

(2) Durante las operaciones experimentales, los operadores deben usar guantes y cambiarlos con frecuencia. Además, el uso de tapas de botellas desechables durante la operación también es una medida eficaz para prevenir la contaminación;

(3) El trabajo de limpieza debe ser oportuno y correcto. Una vez finalizado el trabajo experimental, el área experimental debe limpiarse inmediatamente. Además de limpiar y desinfectar las superficies con desinfectantes convencionales o desinfectar con luz ultravioleta, algunos equipos experimentales también deben desinfectarse mediante alta presión.

4.4 Gestión estricta

1) Controlar estrictamente la entrada y salida del personal del laboratorio. No se permite la entrada o salida del laboratorio a personal ajeno al experimento. De ser posible, se deberán habilitar pasillos y puertas independientes hacia y desde toda el área experimental;

(2) Hay trabajo. ropa use áreas con signos de distinción obvios en cada área experimental (como diferentes colores), el personal no puede llevar ropa de trabajo a otras áreas al salir;

(3) Minimizar el movimiento innecesario en el área experimental. para reducir la posibilidad de infección cruzada.

(4) El área de análisis de productos de amplificación es la fuente más importante de contaminación para los productos de amplificación. El líquido residual no puede arrojarse al laboratorio a voluntad. Debe remojarse y desinfectarse con desinfectante y luego desecharse. del laboratorio Uso Los artículos desechables, como las puntas de pipeta usadas, deben remojarse y desinfectarse con desinfectante antes de su eliminación, como por ejemplo la incineración.

(5) Se pueden utilizar algunas sustancias mutables y tóxicas en el área de análisis de productos de amplificación, y se debe prestar especial atención a la protección de la seguridad del personal experimental. Se debe prestar especial atención a la seguridad y protección del personal experimental.

4.5 Instalaciones experimentales completas

Se necesitan instalaciones experimentales completas para garantizar el trabajo experimental. Se deben equipar los instrumentos y equipos correspondientes de acuerdo con los diferentes contenidos experimentales de cada laboratorio, como los ultralimpios. mesas de trabajo, centrífugas, muestreadores, etc.