¿Cómo evitar la contaminación por ARNasa durante la extracción total de ARN y la transcripción inversa?
ebioTips 3 de Biotecnología: DEPC (pirocarbonato de dietilo) es un potente inhibidor de la ARNasa. El tratamiento de la solución o la superficie del vaso con 0,1 DEPC puede inactivar la RNasa mediante modificación positiva. Agregue 0,1 DEPC al reactivo en una proporción de 0,1:100 y manténgalo a 37 grados Celsius durante 12 horas y esterilice durante 15 minutos adicionales para eliminar el DEPC. La desinfección durante 15 minutos puede eliminar el DEPC residual y finalmente obtener una solución tratada con DEPC. Esta concentración es suficiente para la descontaminación de RNasa en laboratorios generales. Para soluciones con un contenido de RNasa particularmente alto, es posible que sea necesario aumentar la concentración del tratamiento con DEPC. Sin embargo, DEPC reaccionará con el grupo amino de Tris y se degradará, perdiendo su capacidad de inactivar la RNasa. Por lo tanto, las soluciones que contienen Tris no pueden tratarse directamente con 0,1 DEPC. Normalmente, se puede utilizar agua tratada con DEPC para preparar soluciones de Tris. Las soluciones que contienen Tris ya preparadas pueden usar 1 DEPC para inactivar la RNasa, pero un residuo de DEPC demasiado alto puede afectar experimentos posteriores.
ebioTips 4 de biotecnología: trazas de residuos de DEPC en solución modifican las moléculas de purina de ARN mediante carboximetilación, y el ARN carboximetilado se traduce de manera muy ineficiente en sistemas libres de células. Sin embargo, la hibridación entre dicho ARN carboximetilado y ADN o ARN normalmente no se ve afectada significativamente a menos que se modifique un gran número de grupos purina. Por lo tanto, para una solución de 0,1 DEPC, asegúrese de calentarla a 100 grados durante más de 15 minutos para eliminar DEPC antes de realizar experimentos relacionados con el ARN. (Extracto)
La solución DEPC se utiliza principalmente para tratar la RNasa en contenedores y soluciones para el tratamiento de superficies de gran superficie, como bancos de trabajo y muestreadores, aunque algunos productos auxiliares para eliminar la contaminación por RNasa en el medio ambiente. No es necesario. Es bastante bueno usarlo para ayudar al laboratorio a prevenir la muerte de la RNasa. La interferencia de ARN es un estudio exploratorio. Si no se obtienen los resultados esperados, al final será por el entorno de la RNasa. La interferencia de ARN es una investigación exploratoria si no se obtienen los resultados esperados, ya sea por contaminación ambiental o problemas de diseño experimental, será muy problemático de analizar, retrasará la publicación del artículo e incluso perderá los resultados fácilmente obtenidos. ¿No sería una lástima?
Toallitas RNaseZap y RNaseZap de Anbion: una solución que contiene tres ingredientes activos que inactiva instantáneamente la RNasa al contacto con superficies que no son aptas para el secado o la desinfección, como las superficies de trabajo, que se pueden eliminar fácilmente. rociarlo y limpiarlo de la superficie de la mesa, la superficie de la pistola de muestreo u otras superficies de vidrio o plástico, lo cual es muy conveniente.
RNaseZap también se puede utilizar para tratar la superficie de los tubos de ensayo con los dedos para eliminar la contaminación por ARNasa sin dejar residuos que interfieran con las reacciones enzimáticas. ¿Cuánto cuesta RNaseZap? El precio es de 825 yuanes por 250 ml (no diluible) y de 7722 yuanes por 4 litros (venta al público en 2007). Las toallitas son similares a las toallitas húmedas empapadas en RNaseZap. Las toallitas son similares a las toallitas empapadas en RNaseZap. El precio de un tubo de 100 toallitas es de 908 yuanes. Saque una toallita a la vez y simplemente limpie la superficie. Es muy adecuado para limpiar bancos de trabajo, pistolas de muestra, guantes, manijas de puertas, tanques de electroforesis, etc.
El precio de tres recargas es de 2.063 yuanes, lo que equivale a entre 6 y 9 yuanes por un solo uso. Sin embargo, es mejor gastar menos dinero en prevención que gastar más reactivos y energía para reparar fugas repetidamente si algo sale mal. Gastar menos en prevención, gastar menos en prevención.
Biotecnología ebioTips 5: ¿Cómo mantener el laboratorio libre de contaminación por ARNasa? Trate las superficies con regularidad para evitar la contaminación por RNasa. Use guantes durante todo el experimento y cámbiese los guantes inmediatamente al entrar en contacto con otras superficies. Pistola de muestreo dedicada, elija puntas de los dedos y reactivos sin ARNasa Reduzca la ventilación o el flujo de aire en el área experimental de ARN.