Cómo analizar cromatogramas HPLC

Método para analizar cromatogramas:

Configure la fase móvil en el paso de inyección manual, coloque la punta del filtro en la página de fase móvil, encienda la bomba y el detector y ejecute rápidamente para eliminar burbujas, establecer el caudal establecido, estabilizar por un período de tiempo, dejar que la línea base se aplane, usar una aguja de fase líquida para absorber y pesar el control fusionado y desgasificado (el contenido ha sido calibrado).

Abra el bucle cuantitativo e inyecte el líquido en la aguja de fase líquida en el bucle cuantitativo a una velocidad constante. Saque la aguja y cierre la válvula de seis vías inmediatamente. Generalmente, la computadora tomará muestras automáticamente cuando. la válvula de seis vías está cerrada y regístrelo después de que se complete el pico principal. Para el área del pico, generalmente se ejecutan dos controles, con dos inyecciones para cada control, hasta cuatro inyecciones.

Luego comience a pesar la muestra disuelta y desgasificada, y compare el tiempo de retención del pico principal para determinar la posición del pico objetivo en la muestra. El método estándar externo utiliza el área del pico para calcular el contenido. de una determinada sustancia en la muestra de prueba. ?

X=[S muestra*K/m muestra (1-humedad)]*Contenido de sustancia de referencia % *100

Información ampliada

Alto rendimiento cromatografía líquida La cromatografía tiene las características de "cuatro altos y uno ancho":

① Alta presión: la fase móvil es líquida, y al circular por la columna cromatográfica encuentra mayor resistencia para pasar rápidamente. A través de la columna cromatográfica, el líquido portador debe aumentarse la presión.

②Alta velocidad: velocidad de análisis rápida y caudal de líquido portador rápido, que es mucho más rápido que la cromatografía líquida clásica. Por lo general, se necesitan de 15 a 30 minutos para analizar una muestra, y algunas muestras incluso se pueden completar en 5. minutos. Generalmente menos de 1 hora.

③Alta eficiencia: alta eficiencia de separación. La fase estacionaria y la fase móvil se pueden seleccionar para lograr el mejor efecto de separación, que es muchas veces mayor que la eficiencia de separación de las torres de destilación industriales y la cromatografía de gases.

④Alta sensibilidad: el detector UV puede alcanzar 0,01 ng y el volumen de inyección es del orden de μL.

⑤Amplia gama de aplicaciones: más del 70% de los compuestos orgánicos se pueden analizar mediante cromatografía líquida de alto rendimiento, especialmente la separación y análisis de compuestos con altos puntos de ebullición, moléculas grandes, polaridad fuerte y mala calidad térmica. estabilidad, lo que demuestra que Ventajas.

⑥La columna se puede utilizar repetidamente: se pueden separar diferentes compuestos con una sola columna

⑦La cantidad de muestra es pequeña y fácil de recuperar: la muestra no se destruye después de pasar por la columna cromatográfica , y se puede recolectar un solo componente o hacer preparativos.

Además, la cromatografía líquida de alto rendimiento tiene las ventajas de columnas reutilizables, muestras intactas y fácil recuperación. Sin embargo, en comparación con la cromatografía de gases, cada una tiene sus propias ventajas y se complementan entre sí. . La desventaja de la cromatografía líquida de alta resolución es el "efecto extracolumna". En cualquier espacio muerto (inyector, juntas de columna, tubos de conexión y celdas de detección, etc.) entre la inyección y el detector, excepto la columna, si el patrón de flujo de la fase móvil cambia, se producirá cualquier difusión y difusión de las sustancias separadas. La retención conducirá significativamente a una ampliación de los picos cromatográficos y a una reducción de la eficiencia de la columna. Los detectores de HPLC son menos sensibles que los cromatógrafos de gases.

¿Materiales de referencia? Cromatografía líquida de alta resolución de la Enciclopedia Baidu