Cómo entender rápidamente nuevos plásmidos (1)

Los plásmidos son un vector de uso común (Vecto). Son un problema difícil que nunca se puede evitar en campos relacionados con las moléculas. Los plásmidos son necesarios para la clonación molecular, la expresión de proteínas, el empaquetado de virus, etc. Cuando inicia un proyecto o experimento, el primer paso debe ser tener un conocimiento profundo del plásmido que necesita y su estructura de mapa. A continuación, continuaré explicando los diversos elementos de los plásmidos. Si hay alguna omisión, no dude en agregarla.

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Conceptos básicos y clasificación de los plásmidos

Los plásmidos son inherentes a las células biológicas, pueden replicarse independientemente de los cromosomas del huésped y son moléculas de ácido nucleico genéticamente estables. Los plásmidos suelen existir en bacterias y hongos procarióticos. La mayoría son ADN de doble hebra (en su mayoría circulares, y ahora también se encuentran lineales), y algunos son de tipo ARN.

Clasificación de los plásmidos

1. Según la capacidad de los plásmidos para replicarse en las células huésped, se dividen en plásmidos estrictos y plásmidos relajados.

Plásmido estricto: cuando el cromosoma bacteriano se replica una vez, el plásmido también se replica una vez. Cada bacteria contiene de 1 a 2 plásmidos, por lo que el rendimiento de plásmido estricto durante la amplificación es relativamente pequeño. También puede ser relativamente bajo. Cuando se pregunte por qué la concentración de plásmidos no puede aumentar, también podría considerar si es causada por plásmidos estrictos. Los plásmidos de baja copia suelen usarse menos, pero son razonables si existen y aún se pueden usar en algunos lugares. Generalmente, los que tienen un peso molecular elevado son plásmidos estrictos.

Plásmidos relajados: Cuando la replicación de los cromosomas bacterianos se detiene, aún puede continuar replicándose. Cada bacteria contiene alrededor de 20 plásmidos. La replicación de estos plásmidos está bajo el control relajado de la célula huésped, y cada uno puede reproducirse. en grandes cantidades para la replicación, tomar ciertas condiciones para inhibir la síntesis de proteínas puede aumentar la amplificación del plásmido. El contenido y la concentración de plásmidos obtenidos de plásmidos relajados son muy grandes, lo que puede satisfacer las necesidades de experimentos normales.

2. Según la función del vector plasmídico

Vector plasmídico de clonación: Generalmente, el tipo de copia alta es el plásmido relajado mencionado anteriormente. Inserte el gen objetivo requerido en el plásmido. y luego se vierte en la bacteria. En este proceso, se realizan una gran cantidad de clones para amplificar el fragmento objetivo.

Vector plasmídico de expresión: se refiere a agregar algunos elementos de expresión al esqueleto básico del vector de clonación, de modo que el ADN extraño insertado (gen diana) pueda replicarse, transcribirse y traducirse en la célula huésped.

3. Según el tipo de entrada en la célula receptora

Plásmido eucariota

Plásmido procariótico

El plásmido lanzadera se refiere a dos tipos de Un plásmido que se replica en una célula huésped debe tener dos replicones diferentes, eucariota y procariota. Como se muestra en el plásmido pCMV6 a continuación, hay dos promotores, ori y SV40ori, que probablemente sean plásmidos lanzadera.

4 Existen algunos otros métodos de clasificación que no se explicarán aquí. A continuación se muestra una clasificación simple del mapa mental para ayudarlo a verlo rápidamente.

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Características de los plásmidos

Los plásmidos tienen dos características interesantes que nos ayudan a profundizar en nuestro conocimiento y comprensión de los plásmidos. Me pregunto si alguna vez has pensado si pueden existir otros plásmidos en una bacteria. Dado que los plásmidos son pequeñas moléculas circulares de ADN, ¿pueden transferirse entre bacterias? Esto implica dos características interesantes de los plásmidos.

?1.?Incompatibilidad de plásmidos

Dos plásmidos de la misma especie o que estén muy relacionados (por ejemplo, que utilicen el mismo sistema de replicación) no pueden existir de forma estable en una célula. Cuando un nuevo plásmido ingresa a una bacteria que contiene plásmidos, si los dos plásmidos son homólogos o están estrechamente relacionados, competirán entre sí por los recursos y el más apto sobrevivirá.

2. Transferibilidad de plásmidos

En condiciones naturales, los plásmidos pueden transferirse a nuevas bacterias huésped mediante la acción de genes móviles específicos. Los plásmidos actualmente en el laboratorio contienen básicamente genes de resistencia seleccionados y tienen fuertes capacidades de resistencia a los antibióticos, pero carecen de genes móviles para garantizar que los plásmidos no se propaguen ni contaminen el medio ambiente.

El punto más importante: después de completar el experimento, todos los consumibles, reactivos, cepas y medios de cultivo residuales relacionados con el experimento con plásmidos deben esterilizarse. ! Ésta es la cualidad básica de un investigador científico. No puedes cometer un gran error sólo porque eres vago.

Este número trata principalmente sobre cómo después de obtener un plásmido, debe juzgar si cumple con sus requisitos básicos en función de sus propios propósitos. Por ejemplo, ¿necesita un tipo relajado o estricto, necesita un plásmido de clonación o un plásmido de expresión, necesita un plásmido lanzadera o solo procariótico/eucariota? Esta es la parte más básica antes de aprender a ver el mapa y, en ocasiones, tendrá efectos inesperados.

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