Cómo utilizar el tinte fluorescente 33258 de sigma

Instrucciones de uso (solo como referencia):

1. Prepare una solución de tinción Hoechst 33258 de 10 a 50 M con PBS o un tampón adecuado.

2. Tinción de células o tejidos fijados:

Para células o muestras de tejido fijadas, después de la fijación, lavar adecuadamente para eliminar el fijador. Si se necesita tinción por inmunofluorescencia posteriormente, realice primero la tinción por inmunofluorescencia y luego siga los pasos posteriores para la tinción Hoechst33258 una vez completada la tinción. Si no se requiere otra tinción, proceda directamente a la tinción posterior con Hoechst 33258.

a) Para células o secciones de tejido adherentes: añadir una cantidad adecuada de solución de tinción Hoechst 33258 para cubrir la muestra. Para células suspendidas: agregue al menos 3 veces el volumen de solución de tinción a analizar y mezcle bien. Dejar a temperatura ambiente durante 3-5 minutos.

b) Aspirar la solución de tinción Hoechst 33258 y lavar 2-3 veces con TBST, PBS o suero fisiológico durante 3-5 minutos cada vez.

c) Observar directamente bajo un microscopio de fluorescencia u observar bajo un microscopio de fluorescencia después del montaje. La longitud de onda de excitación es de 350 nm y la longitud de onda de emisión es de 460 nm.

3. Tinción de células o tejidos vivos:

a) Añadir una cantidad adecuada de solución de tinción Hoechst 33258 al cultivo celular, aproximadamente 1/10 del volumen del medio de cultivo celular. y debe cubrir completamente las células a teñir de las muestras. Por lo general, es necesario agregar 1 ml de solución de tinción a un pocillo de una placa de seis pocillos y 100 µl de solución de tinción a un pocillo de una placa de 96 pocillos.

b) Cultivar las células a 37°C durante 10 a 20 minutos.

c) Lavar las células dos veces con PBS o tampón adecuado.

d) Observar directamente bajo un microscopio de fluorescencia u observar bajo un microscopio de fluorescencia después del montaje. La longitud de onda de excitación es de 350 nm y la longitud de onda de emisión es de 460 nm.