En el experimento de determinación del peso molecular de las proteínas, ¿cuáles son las funciones de los distintos reactivos en la solución de muestra de electroforesis SDS-PAGE?

SDS-PAGE es una técnica de electroforesis de uso común que utiliza gel de poliacrilamida como medio de soporte. El gel de poliacrilamida se polimeriza a partir de los monómeros acrilamida y metilendioxibisacrilamida y el proceso de polimerización es catalizado por radicales libres. Hay dos métodos comunes de polimerización catalítica: polimerización química y fotopolimerización. La polimerización química utiliza persulfato de amonio (AP) como catalizador y tetrametiletilendiamina (TEMED) como acelerador. Durante el proceso de polimerización, TEMED cataliza el persulfato de amonio para generar radicales libres, lo que desencadena la polimerización de monómeros de acrilamida y, al mismo tiempo, las cadenas de bisacrilamida y acrilamida metiladas se entrecruzan para formar una estructura de red tridimensional.

Según exista efecto de concentración, PAGE se puede dividir en sistemas continuos y sistemas discontinuos. En un sistema de electroforesis de sistema continuo, el valor de pH del tampón es el mismo que la concentración del gel, y las partículas cargadas dependen principalmente de los efectos de carga y tamiz molecular bajo la acción del campo eléctrico. En un sistema discontinuo, debido a la discontinuidad de la composición iónica del tampón, el valor de pH, la concentración del gel y el gradiente de potencial, las partículas cargadas que nadan en el campo eléctrico no sólo tienen un efecto de carga, un efecto de tamiz molecular, sino también un efecto de concentración. entonces su separación. La claridad y resolución de la banda son mejores que las primeras. Los sistemas discontinuos constan de un tampón de electrodo, un gel concentrador y un gel separador. El gel de apilamiento es un gel macroporoso polimerizado mediante catálisis AP y el tampón de gel es Tris-HC1 con un valor de pH de 6,7. El gel de separación es un gel de poro pequeño polimerizado mediante catálisis AP, el tampón de gel es Tris-HC1 con un valor de pH de 8,9 y el tampón de electrodo es un tampón de Tris-glicina con un valor de pH de 8,3. Los dos tamaños de poro del gel, dos sistemas tampón y tres valores de pH crean un sistema discontinuo. El tamaño de los poros del gel, el pH y las discontinuidades en la composición iónica del tampón son los principales factores que afectan la concentración de la muestra.

El SDS es un detergente aniónico. Como reactivo desnaturalizante y cosolvente, puede destruir los enlaces de hidrógeno intramoleculares e intermoleculares, desplegar moléculas y destruir las proteínas secundarias y terciarias de la estructura de las moléculas de proteínas. Los agentes reductores fuertes como el mercaptoetanol y el ditiotreitol pueden romper los enlaces disulfuro entre los residuos de cisteína. En la muestra y el gel, después de agregar el agente reductor y el SDS, las moléculas se despolimerizan en cadenas polipeptídicas y las cadenas laterales de los aminoácidos despolimerizados se combinan con el SDS para formar micelas de proteína-SDS, cuya carga negativa excede en gran medida la carga original de la proteína, eliminando la interacción entre diferentes moléculas, diferencias de carga y diferencias estructurales.

Por tanto, la poliacrilamida proporciona un vehículo para la electroforesis de proteínas, y su propiedad de coagulación está directamente relacionada con el éxito o fracaso de la electroforesis, y está estrechamente relacionada con el acelerador de la coagulación y el entorno en el que se debe elegir el tampón gelificante; sistema tri-HCL, AP Proporciona radicales libres, TEMED es un catalizador, cataliza la reacción de polimerización inducida por radicales libres. El dodecilsulfato de sodio (SDS) es un detergente catiónico; El dodecilsulfato de sodio (SDS) es un detergente catiónico que tiene cuatro funciones: descarga proteínas, disocia los enlaces de hidrógeno entre proteínas, elimina interacciones hidrofóbicas dentro de las moléculas de proteínas y desdobla péptidos.