Razones de la eficiencia de transfección de ARNip insatisfactoria (1)

Debido a diferentes secuencias de ARN, diferentes condiciones de síntesis y la presencia o ausencia de marcadores fluorescentes y de otro tipo, los reactivos de ARN y transfección óptimos se determinan en diferentes circunstancias. Las condiciones también serán diferentes, por lo que se recomienda realizar la optimización antes del experimento.

2. La densidad celular no es alta

Durante la transfección, ajuste la densidad celular a un 20-40% de confluencia. Las células que se transfectan con éxito con ARNip tendrán una regulación negativa de la expresión del gen objetivo, pero las células que no se transfectan con éxito no se verán afectadas. En este momento, la eficiencia de la transfección y el número total de células se vuelven importantes. Cuanto mayor sea el número de células, mejor será la tasa de transfección. Debido a los efectos urgentes del silenciamiento de ARNip, la qRT-PCR solo se puede realizar 48 horas después de la transfección y la detección de proteínas solo se puede realizar entre 48 y 72 horas después de la transfección. Si la densidad de dispersión de la placa es demasiado alta durante la transfección, por un lado, el efecto de transfección celular será deficiente, lo que afectará directamente el efecto de silenciamiento y la confiabilidad de los datos, por otro lado, después de 48 horas o incluso más, cuando se realice el silenciamiento; la detección está en el punto óptimo. Las células demasiado densas afectarán el estado de la célula y, por tanto, los resultados experimentales.

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