Principios básicos de la tecnología RNAi
Los principios básicos de la tecnología RNAi son los siguientes:
La interferencia de ARN (RNAi para abreviar) significa que un pequeño ARN bicatenario (dsRNA) puede bloquear de manera eficiente y específica la expresión de genes específicos en el cuerpo, promueve la degradación del ARNm e induce a las células a exhibir el fenotipo de deleción de genes específicos.
RNAi es una tecnología eficiente, específica y de bloqueo de genes. El ARNi puede analizar rápidamente la función de los genes diana. El ARNi se ha desarrollado rápidamente y se ha convertido en una herramienta poderosa para la investigación genómica funcional y la investigación de genética inversa. La tecnología RNAi fue nombrada uno de los diez principales avances tecnológicos en 2002 por la revista Science. ?Mecanismo molecular del ARNi
①Los genes exógenos se integran aleatoriamente en el genoma de la célula huésped para producir algo de ARNbc. La endonucleasa Dicer en el citoplasma corta estos ARNbc en múltiples ARN bicatenarios cortos (aproximadamente 21 ~ 25 pb) con longitudes y estructuras específicas, a saber, ARNip.
②El ARNip se funde en una cadena sentido y una cadena antisentido bajo la acción de la ARN helicasa, y luego el ARNip antisentido se combina con algunas enzimas del cuerpo para formar un complejo silenciador inducido por ARN (RISC).
③RISC se une específicamente a la región homóloga del ARNm expresado por genes exógenos. Tiene la función de una nucleasa, corta el ARNm en el sitio de unión y el ARNm fragmentado escindido se degrada inmediatamente.
④ Amplificación de la señal de ARNi: el ARNip no solo puede guiar a RISC para escindir el ARNm monocatenario homólogo, sino que también puede usarse como cebador para unirse al ARN objetivo y sintetizarse bajo la acción de ARN dependiente. ARN polimerasa (ARN polimerasa dependiente de RN, RdRP) Más ARNds nuevo.
Dicer escinde luego el ARNds recién sintetizado para producir una gran cantidad de ARNip secundario, lo que amplifica aún más el efecto del ARNi y, en última instancia, degrada por completo el ARNm objetivo.