Método de extracción de ARN

1. Método de extracción con fenol: primero use la enzima de huevo K y SDS para romper las células, digerir la proteína, luego extraer con fenol y cloruro de fenol y tomar el sobrenadante después de una centrifugación a alta velocidad. El tamaño del ADN obtenido es de 100-150 kb.

2. Método de despolimerización de formamida: rompa las células como se indica arriba, luego use formamida de alta concentración para despolimerizar la combinación de proteína y ADN, y luego dialice para obtener ADN, obteniendo aproximadamente 200 KB de ADN.

3. Método de enrollado con varilla de vidrio: lisar las células con clorhidrato de guanidina, esparcir la solución de lisis sobre etanol y luego usar una varilla de vidrio en forma de gancho o de U para agitar suavemente en la interfaz y el ADN. El precipitado se envuelve alrededor de la varilla de vidrio superior. El ADN resultante tiene aproximadamente 80 kb.

4. Método de precipitación con alcohol isopropílico: Básicamente igual que el método 1, solo use 2 veces el volumen de alcohol isopropílico en lugar de etanol para eliminar la molécula pequeña de ARN (disuelta en alcohol isopropílico).

5. Método de preparación rápida del surfactante: use el surfactante Triton X-100A o NP40 para alterar las células, luego use proteinasa K o fenol para eliminar las proteínas y use precipitación con etanol o diálisis.

6. Preparación rápida mediante método de calentamiento: calentar a 96°C-100°C durante cinco minutos, luego centrifugar para tomar el sobrenadante, que puede usarse para reacciones de PCR.

7. Preparación rápida de desnaturalización alcalina: primero utilizar NaOH durante 20 minutos, luego añadir HCl para neutralizar, centrifugar y tomar el sobrenadante, que contiene una pequeña cantidad de ADN.

Datos ampliados:

Principios de extracción de ADN:

1. Asegurar la integridad de la estructura primaria del ácido nucleico;

2. . Ácido nucleico La muestra no debe contener disolventes orgánicos que puedan inhibir enzimas ni concentraciones excesivamente altas de iones metálicos;

3. La contaminación de otras macromoléculas biológicas como proteínas, polisacáridos y moléculas de lípidos debe reducirse al mínimo. ;

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4. También se deben eliminar en la medida de lo posible otras moléculas de ácido nucleico, como el ARN.

Enciclopedia Baidu-Extracción de ADN