¿Qué líneas celulares se pueden utilizar para estudiar la apoptosis?

La detección de apoptosis puede ser: (1) utilizada en el estudio de diversas muestras patológicas, incluidas células y tejidos tumorales; (2) utilizada en diagnóstico y tratamiento clínicos, desarrollo de nuevos fármacos, desarrollo de preparaciones biológicas, radioterapia tumoral y terapia génica de exploración celular. de tumores desde la perspectiva de la apoptosis; (3) Desempeña un papel fundamental en la detección temprana de enfermedades relacionadas y la evaluación de la eficacia de la radioterapia.

Método de doble marcaje con sonda fluorescente

Principio experimental

Este experimento utiliza 1 μg/ml de HT trivalente para inducir la apoptosis en células HL-60 cultivadas in vitro A. También se observó un pequeño número de necrosis celular. La doble tinción de células con Hoechst33342 y yoduro de propidio (PI) diferencia las células apoptóticas, las células necróticas y las células normales.

La triptorelina (HT) es un fármaco antitumoral desarrollado de forma independiente en mi país. Tiene un buen efecto curativo sobre la leucemia mieloide aguda, la leucemia monocítica aguda, etc. Los estudios han demostrado que la HT puede inducir apoptosis en células HL-60 en el rango de 0,02 ~ 5 μg/ml durante 2 horas y mostrar características típicas de apoptosis.

La membrana celular es una membrana biológica selectiva y los colorantes biológicos generales como el PI no pueden penetrar la membrana plasmática. Cuando las células están necróticas, la membrana plasmática está incompleta y el PI ingresa a las células y puede incrustarse en el ADN o el ARN, lo que provoca que las células necróticas se tiñen, mientras que las células apoptóticas y las células vivas no se tiñen. Algunos tintes de células vivas son lipófilos y pueden ingresar a las células vivas a través de la membrana, logrando así la tinción de células vivas. Hoechst33342 es un tinte fluorescente reactivo con baja toxicidad y es un derivado del bis (bencimidazol). Hoechst33342 es un tinte fluorescente reactivo con baja toxicidad y un derivado del bis (bencimidazol). Puede unirse específicamente al ADN (principalmente la región de la base AT) y mostrar células apoptóticas y células vivas. Cualquier célula con vesículas apoptóticas es una célula apoptótica.

Materiales experimentales

Células HL-60 de leucemia promielocítica humana

Reactivos/kits

Tratonolide base Tris -Hcl EDTA buffer tampón de lisis alcalino SDS acetato de sodio alcohol isopropílico etanol bromofenol azul indicador de sacarosa TBE tampón de electroforesis agarosa bromasa PI número de lote de licor madre Ho33342 número de lote de licor madre

Instrumento/consumibles

Microscopio de fluorescencia instrumento de electroforesis tanque de electroforesis micromuestreador centrífuga cubreobjetos para portaobjetos de tubo

Microscopio de fluorescencia instrumento de electroforesis tanque de electroforesis micromuestreador centrífugo cubreobjetos para portaobjetos de tubo