Cromatografía líquida de imina cíclicaLa cromatografía líquida de alta resolución se divide en cromatografía de adsorción líquido-sólido, cromatografía de distribución líquido-líquido (fase normal y fase reversa) y cromatografía de intercambio iónico según el mecanismo de separación. , cromatografía de pares iónicos y cromatografía de exclusión por tamaño. La cromatografía líquido-sólido utiliza adsorbentes sólidos y el principio de separación de componentes en la columna cromatográfica se basa en la capacidad de adsorción de componentes relativos fijos. El proceso de separación es un proceso de equilibrio de adsorción-desorción. Los adsorbentes más utilizados son el gel de sílice o la alúmina, con tamaños de partículas de 5 a 10 µm. Es adecuado para separar componentes con un peso molecular de 200~1000. Se utiliza principalmente para compuestos no iónicos que son propensos a formar colas. A menudo se utiliza para separar isómeros. 2. La cromatografía líquido-líquido utiliza una sustancia líquida específica que se recubre sobre la superficie de un soporte o se une químicamente a la superficie de un soporte para formar una fase estacionaria. El principio de separación se basa en las diferentes solubilidades de los componentes. separados en la fase móvil y la fase estacionaria por separado. El proceso de separación es un proceso de equilibrio de distribución. La fase estacionaria recubierta tiene buena inercia; la fase móvil debe estar presaturada con la fase estacionaria para minimizar la pérdida de la fase estacionaria de la superficie de la camilla. Los cambios de temperatura y las diferencias en diferentes lotes de fase móvil a menudo conducen a cambios en; la columna cromatográfica; en la fase móvil. La presencia de una fase estacionaria puede complicar la separación y recolección de muestras. Las fases estacionarias recubiertas rara vez se utilizan hoy en día debido a la dificultad de evitar la pérdida de fijación. Actualmente, se utilizan principalmente fases estacionarias de enlaces químicos, como C18, C8, columna amino, columna ciano y columna fenilo. Dependiendo de la polaridad de la fase estacionaria y la fase móvil, la cromatografía líquido-líquido se puede dividir en cromatografía de fase normal (NPC) y cromatografía de fase reversa (RPC). La cromatografía en fase normal (NPC) utiliza fases estacionarias polares (como polietilenglicol, fases unidas con amino y nitrilo) y la fase móvil son disolventes hidrofóbicos relativamente no polares (alcanos como n-alcanos y ciclohexano). , tetrahidrofurano, cloroformo, etc. para ajustar el tiempo de retención de los componentes. Comúnmente utilizado para separar compuestos polares y moderadamente polares (como fenoles, aminas, carbonilos, aminoácidos, etc.). La cromatografía de fase inversa generalmente utiliza fases estacionarias no polares (como C18, C8, la fase móvil es agua o tampón, y a menudo se añaden disolventes orgánicos miscibles en agua como metanol, acetonitrilo, alcohol isopropílico, acetona y tetrahidrofurano); ajustar el tiempo de retención. RPC es el más utilizado en la cromatografía líquida moderna y representa aproximadamente el 80% de todas las aplicaciones de HPLC. Con el rápido desarrollo del empaquetamiento de columnas cromatográficas, el rango de aplicación de la cromatografía de fase inversa se ha ampliado gradualmente y ahora se ha aplicado al análisis de algunas muestras inorgánicas o muestras fácilmente disociadas. Para controlar la disociación de la muestra durante el análisis, a menudo se utilizan tampones para controlar el pH de la fase móvil. Sin embargo, cabe señalar que el valor de pH de C18 y C8 suele ser de 2,5 a 7,5 (2 a 8). Un valor de pH demasiado alto disolverá el gel de sílice, y un valor de pH demasiado bajo provocará la unión. los grupos alquilo se caigan. Se informa que las nuevas columnas comerciales funcionan en un rango de pH de 1,5 a 10. Tabla de comparación entre cromatografía de fase normal y cromatografía de fase reversa Cromatografía de fase normal Cromatografía de fase inversa La fase estacionaria tiene polaridad alta ~ media media ~ baja. La fase móvil tiene polaridad baja ~ media media ~ alta. Eluya primero si la polaridad es alta, eluya primero. Como se puede ver en la tabla anterior, el orden de elución de la cromatografía de fase normal y la cromatografía de fase reversa no es consistente ni visible cuando la polaridad es media, la cromatografía de fase normal y la cromatografía de fase reversa. (como No existe un límite claro entre las fases estacionarias unidas por aminas). 3. La fase estacionaria de la cromatografía de intercambio iónico es la resina de intercambio iónico. Los polímeros reticulados de estireno y divinilo de uso común se utilizan como esqueletos, y hay grupos carboxilo, ácidos sulfónicos (llamados resinas de intercambio catiónico) o sales de amonio cuaternario conectadas a aromáticos terminales. anillos en la superficie (resina de intercambio aniónico). El principio de separación de componentes separados en una columna cromatográfica es que los iones ionizables de la resina sufren un intercambio reversible con iones de la misma carga en la fase móvil y iones del componente a medir según las diferentes relaciones entre cada ion y el componente a medir. grupo de intercambio iónico La atracción de carga separa los iones. Los tampones se utilizan habitualmente como fases móviles en la cromatografía de intercambio iónico. El tiempo de retención de los componentes separados en la columna de intercambio iónico no solo está relacionado con la fuerza de interacción entre los iones componentes y los grupos de intercambio iónico en la resina, sino que también se ve afectado por el valor del pH y la fuerza iónica de la fase móvil. Cuanto mayor sea la concentración de sal en la fase móvil, mayor será la fuerza iónica, lo que no favorece la disociación de la muestra y hace que la muestra fluya más rápido. La cromatografía de intercambio iónico se utiliza principalmente para analizar ácidos orgánicos, aminoácidos, péptidos y ácidos nucleicos.

4. La cromatografía de pares iónicos, también conocida como cromatografía de iones dipolo, es una rama de la cromatografía líquido-líquido. Se basa en la formación de compuestos de pares iónicos neutros entre los iones del componente medido y los iones del reactivo de par iónico, que aumentan la solubilidad en la fase estacionaria no polar, mejorando así su separación. Se utiliza principalmente para analizar sustancias ácidas y alcalinas con alta fuerza iónica. Los reactivos de pares iónicos más utilizados para analizar sustancias básicas son los alquilsulfonatos, como el pentanosulfonato de sodio y el octanosulfonato de sodio. Además, el ácido perclórico y el ácido trifluoroacético también pueden formar pares iónicos fuertes con diversas muestras alcalinas. Las sales de amonio cuaternario de tetrabutilamonio se usan comúnmente en ácidos analíticos como el bromuro de tetrabutilamonio y el fosfato de tetrabutilamonio. Las columnas de cromatografía ODS (es decir, C18) se usan comúnmente para la cromatografía de pares iónicos. La fase móvil es metanol-agua o acetonitrilo-agua y se agrega al agua un reactivo de par iónico de 3 a 10 mmol/l para realizar la separación dentro de un cierto rango de pH. El tiempo de retención del componente medido está relacionado con la naturaleza y concentración del par iónico, la composición de la fase móvil, su valor de pH y su fuerza iónica. 5. Cromatografía de exclusión: la fase estacionaria es un empaque poroso con un cierto tamaño de poro y la fase móvil es un solvente que puede disolver la muestra. Los compuestos de peso molecular pequeño pueden entrar en los poros y tienen un tiempo de retención prolongado; los compuestos de peso molecular grande no pueden entrar en los poros y salir directamente con la fase móvil. Utiliza la diferencia en la capacidad de bloqueo de los tamices moleculares para componentes con diferentes pesos moleculares para completar la separación. Comúnmente utilizado para separar compuestos macromoleculares, como extractos de tejidos, péptidos, proteínas, ácidos nucleicos, etc. El principio básico de la cromatografía es utilizar las diferencias en las propiedades físicas y químicas de los componentes de la mezcla de muestra para distribuir cada componente en dos fases inmiscibles en distintos grados. Cuando las dos fases se mueven entre sí, los componentes se redistribuyen repetidamente en las dos fases, consiguiendo así la separación de la mezcla. Entre las dos fases, la fase estacionaria se llama fase estacionaria; la fase móvil se llama fase móvil. Clasificación: Según la fase móvil - el gas es la fase móvil - cromatografía de gases - la fase estacionaria es cromatografía líquida gas-líquido la fase estacionaria es sólido cromatografía gas-sólido - el líquido es la fase móvil - cromatografía líquida - la fase estacionaria es líquida cromatografía líquido-líquido - Cromatografía líquida - La fase estacionaria es un líquido Líquido - Cromatografía líquida - Líquido - Cromatografía líquida - Una fase estacionaria sólida - Líquido - Cromatografía sólida - La cromatografía supercrítica depende de cuándo la fase móvil es un líquido que opera cerca de la temperatura crítica y presión crítica Formas de unir la fase estacionaria - Fase estacionaria en un tubo cilíndrico - Cromatografía en columna - Fase estacionaria recubierta sobre una placa de vidrio o metal - Cromatografía de película delgada (cromatografía en placa) - Fase estacionaria líquida recubierta sobre papel - Cromatografía en papel (cromatografía en placa) Cromatografía de adsorción - Adsorción diferencial de los componentes de la muestra en la superficie de la fase estacionaria - Cromatografía de exclusión por tamaño - Separación de los componentes de la muestra en diferentes tamaños de poro utilizando los diferentes tamaños de poro de la fase estacionaria. Cromatografía de adsorción: los componentes de la muestra tienen diferentes fuerzas de adsorción en la superficie de la fase estacionaria - Cromatografía de exclusión por tamaño: utiliza diferentes tamaños de poro de la fase estacionaria para separar los componentes de la muestra según el tamaño molecular - Cromatografía de intercambio iónico: la interacción entre diferentes iones y cargas opuestas de la cromatografía de gases en fase estacionaria con diferentes fuerzas La cromatografía de gases solo es adecuada para analizar compuestos orgánicos altamente volátiles y químicamente estables, mientras que la cromatografía líquida de alta resolución es adecuada para analizar sustancias que son difíciles de analizar mediante cromatografía de gases, como aquellas con poca volatilidad. , fuerte polaridad y propiedades químicas. Sustancias biológicamente activas y térmicamente inestables. Por tanto, la gama de aplicaciones de HPLC se extiende mucho más allá de la cromatografía de gases. 1. Cromatografía de adsorción, también conocida como cromatografía líquido-sólido: la fase móvil es líquida y la fase estacionaria es sólida. Principio de separación: la fase estacionaria es un adsorbente sólido y el adsorbente es el centro de adsorción en la superficie de materiales granulares porosos. Los componentes de muestra compiten con la fase móvil por los centros de adsorción. La capacidad de adsorción de cada componente es diferente, por lo que el tiempo de retención de los componentes en la fase estacionaria también es diferente, consiguiendo así la separación. Fase estacionaria: La fase estacionaria suele ser un adsorbente sólido, como gel de sílice altamente polar, alúmina, carbón activado, polietileno, poliamida, etc. El más utilizado es el gel de sílice reactivo. El más utilizado es el gel de sílice reactivo. Fase móvil: disolvente orgánico débilmente polar o una mezcla de disolvente no polar y disolvente polar, como n-alcanos (n-hexano, n-pentano, n-heptano, etc.), cloruro de metileno/metanol, acetato de etilo/acetonitrilo. . Aplicación: Sigue siendo el método más eficaz para la separación de isómeros estructurales polares y la separación de familias, como la separación de isómeros de pesticidas y la separación de alcanos, alquenos e hidrocarburos aromáticos en el petróleo.