Especificaciones técnicas para la recopilación de recursos de especímenes fósiles de polen

Los especímenes fósiles de polen son recursos naturales no renovables. Para que los investigadores y el personal técnico pertinente utilicen mejor los recursos fósiles de esporopolen y se muestren al público, se han formulado las "Especificaciones técnicas para la recolección de recursos de muestras de polen fósil" para garantizar la adquisición y utilización racional de los recursos fósiles de esporopolen. recursos de especímenes.

La disposición de los recursos de especímenes fósiles de polen tiene su propia particularidad, y necesita ser obtenido a partir de sedimentos blandos o rocas de diferentes litologías mediante métodos físicos o químicos adecuados. Los requisitos de seguridad de los laboratorios analíticos, la preparación de muestras para microscopía óptica de transmisión y microscopía electrónica, la denominación de fósiles de esporopolen y la preservación y transporte de especímenes de fósiles de esporopolen requieren algunos enfoques y métodos especiales. Esta especificación técnica describe detalladamente todo el proceso de recolección de especímenes fósiles de polen.

Este reglamento es propuesto por la Plataforma Nacional de Condiciones Básicas de Ciencia y Tecnología.

Este protocolo fue redactado por: Instituto de Geología y Paleontología de Nanjing, Academia de Ciencias de China.

El redactor de este reglamento: el rey Zhou.

Este procedimiento lo explica la Plataforma Nacional de Intercambio de Recursos de Especímenes Fósiles y Minerales de Roca.

1 Alcance

Este reglamento especifica el alcance y la terminología utilizada en la recolección de especímenes fósiles de esporopolen, los principios de recolección de especímenes fósiles de esporopolen, los requisitos para el procesamiento en laboratorio y la selección de taxones. .

2 Documentos normativos de referencia

Las cláusulas de los siguientes documentos se convierten en cláusulas de esta especificación al citar esta especificación. Todas las revisiones posteriores (excluidas las erratas) o revisiones de documentos de referencia fechados no se aplican a este Programa. Sin embargo, se anima a todas las partes en un acuerdo en virtud del presente Reglamento a investigar si se pueden utilizar las últimas versiones de estos documentos. Para los documentos de referencia sin fecha, se aplicará la última versión de este reglamento.

GB/T2260—2007 Código de División Administrativa de la República Popular China

GB/T9649.0—2009 Código de Clasificación de Terminología Geológica y Mineral Parte 9: Cristalografía y Mineralogía

3 Términos y Definiciones

3.1 Palinología

Se refiere a la materia que estudia principalmente las esporas y polen de plantas terrestres, fragmentos de plantas, diminutos protistas, diminutos animales y fósiles de hongos. .

3.2 Esporas

Se refieren principalmente a las células reproductoras de los helechos, con un diámetro inferior a 200 μm.

3.3 Polen

Se refiere a las células reproductoras de gimnospermas y angiospermas.

3.4 Megasporas

Se refiere a las células reproductoras femeninas de helechos y plantas con semillas. La definición típica de megasporas fósiles dispersas son las esporas de helecho con un diámetro superior a 200 μm, que aparecieron por primera vez en el Devónico y continúan hasta el día de hoy.

3.5 Cryptosporidium

El criptosporidium es una espora sin el marcado de tétradas trilobuladas o unilobuladas, que puede tener o no características de contacto incluyendo algunas tétradas "permanentes", diploides y; Hongos monoesporales, muy útiles para determinar la edad estratigráfica desde el Ordovícico Medio hasta el Devónico.

3.6 Tipo de espora (forma de espora)

Se refiere a desechos orgánicos con un diámetro inferior a 5 mm, incluidas esporas, polen, quistes de dinoflagelados, especies sospechosas, desechos orgánicos, etc. Se puede dividir en tipo de microsporas (diámetro inferior a 200 μm) y tipo de esporas grandes (diámetro de 180 μm ~ 5 mm ~ 5 mm).

4 Disposición de las muestras fósiles de esporopolen

4.1 Tecnología de procesamiento de muestras fósiles de esporopolen

4.1.1 Preparación

Antes del procesamiento en laboratorio, primero , verificar si los registros de las muestras recolectadas en el sitio están completos y si el empaque de las muestras está intacto; en segundo lugar, seleccionar y registrar las muestras, determinar la tecnología de procesamiento correspondiente de acuerdo con la litología y realizar los números de experimento.

Durante el procesamiento, cada muestra debe tener un registro completo del proceso, especialmente el número que figura en el recipiente utilizado en el procesamiento de la muestra.

4.1.2 Tratamiento de rocas sedimentarias y sedimentos no consolidados en diferentes periodos

1) Para sedimentos consolidados se deben eliminar los contaminantes superficiales, así como los sondeos, paredes de pozos y muestras de afloramientos. Los recortes de perforación y las muestras finas se pueden lavar con agua en un vaso de precipitados o sobre una malla fina. Se debe comprobar previamente el agua utilizada para ver si contiene impurezas que puedan contaminar la muestra.

2) Las muestras consolidadas generalmente se pueden dividir en partículas del tamaño de un guisante o más finas.

3) Pesar una cantidad adecuada de muestra (normalmente 5g o 10g) y colocarla en un vaso de precipitados de polipropileno rotulado. Si la muestra tiene bajo contenido orgánico, se debe aumentar el volumen de análisis.

4) Añadir lentamente un 20% (se puede aumentar la concentración) de ácido clorhídrico en el vaso de precipitados. Si hay alguna reacción en este momento, podrás ver que ha producido muchas burbujas. Para muestras que reaccionan violentamente, después de que la reacción se detiene y las partículas finas precipitan, vierta con cuidado la solución ácida usada y agregue ácido clorhídrico nuevo. Si la muestra es rica en calcio, este proceso se puede repetir varias veces hasta que se elimine el calcio. Dependiendo de la composición de la muestra, el tiempo necesario para que las partículas de la muestra se sedimenten puede variar de 30 minutos a 2 horas o más (durante la noche), y luego se decanta la solución ácida gastada. Para garantizar que no se produzca precipitación de fluoruro al agregar ácido fluorhídrico, se debe inyectar agua destilada en la muestra varias veces (generalmente de 4 a 5 veces) y lavar en un vaso de precipitados hasta que la muestra sea neutra.

5) Después de que la muestra se vuelva neutra, vierta la mayor parte del agua y agregue una pequeña cantidad (20 ~ 30 ml) de 58 % ~ 62 % de ácido fluorhídrico a la muestra. La violenta reacción durará unos 10 minutos. Si no necesita acelerar el proceso de descomposición de los minerales, puede agregar de 30 a 50 ml de ácido fluorhídrico, dejar reposar la muestra durante unas horas o toda la noche y luego verter el ácido usado. Como ocurre con la mayoría de tratamientos, una vez que el calor generado al añadir una pequeña cantidad de ácido fluorhídrico haya disminuido, se puede pasar directamente al siguiente paso.

6) Agregue aproximadamente 30 ml de ácido clorhídrico y 100 ml de ácido fluorhídrico al 58 % ~ 62 % y coloque el vaso en agua caliente a 90 ℃ durante al menos 3 horas, dependiendo del tamaño de la muestra y la velocidad de descomposición. Si los minerales no se eliminan por completo después del tratamiento, se debe verter la solución ácida y repetir el proceso. Una vez eliminados los componentes minerales, se decanta nuevamente la solución ácida y se lava el residuo con agua hasta neutralidad según el método descrito anteriormente (paso 4). Luego se transfiere la muestra a un embudo Buchner con un disco o malla de vidrio perforado (2 mm de diámetro).

7) El embudo de vidrio fritado se conecta a la botella filtrante mediante un fuelle manual a través de un tapón de esponja. Las muestras se lavaron repetidamente con grandes cantidades de agua para garantizar una neutralidad completa y al mismo tiempo eliminar al menos parcialmente todas las partículas de menos de 8 μm de diámetro (incluidos los minerales arcillosos). Luego, si el tiempo lo permite, remoje la muestra restante en el embudo en ácido clorhídrico al 20% durante la noche. Luego se vierte la solución ácida y se enjuaga con abundante agua a través de una placa de vidrio poroso para que la muestra vuelva a ser neutra. Después de la filtración, use una lente objetiva para inspeccionar el filtrado y asegurarse de que no haya fósiles. Si hay fósiles, es necesario reciclarlos.

8) Colocar parte del residuo sobre un portaobjetos de vidrio, utilizar pegamento de glicerina o fijador sintético para realizar secciones y examinar bajo luz transmitida. Derrita el gel de glicerina sobrante en el tubo de ensayo, coloque una pequeña cantidad en el portaobjetos con una pipeta, use una varilla de vidrio para colocar una cantidad adecuada de muestra en el gel de glicerina y revuelva, luego coloque el portaobjetos en un plato caliente a aproximadamente 67 °C para evaporar el agua. Cuando la materia orgánica y la goma de glicerina estén mezcladas tapar con un vaso. El fijador se sintetiza a partir de Clearcol. Coloque unas gotas sobre el cubreobjetos y mezcle con cantidades aproximadamente iguales de residuo acuoso. Se puede secar equilibrando el calor generado por la bombilla en ángulo, y el cubreobjetos se puede sellar al portaobjetos manteniéndolo paralelo. Después del examen de secciones delgadas, para mejorar la calidad de las secciones, como eliminar algunas o todas las pequeñas partículas libres y/o diluir el color de las esporas para que los fósiles sean más fáciles de observar bajo la luz, se pueden utilizar dos métodos. : uno es el tratamiento de oxidación (paso 9), el otro es el paso 10; el segundo es la vibración ultrasónica (paso 11)). Se pueden utilizar ambos métodos.

9) Añadir ácido nítrico fumante a la muestra en el embudo de vidrio fritado que haya alcanzado el límite de tiempo de reacción predeterminado (15 s a 2 min por primera vez) (añadir lentamente para medir la reacción). Si el tiempo de reacción es mayor se pueden utilizar otros reactivos, como ácido nítrico concentrado, reactivo de Shure (solución acuosa saturada de hipoclorito de potasio y ácido nítrico) e hipoclorito de sodio (blanqueador). El objetivo principal es convertir la materia orgánica parcialmente degradada en ácido húmico. Filtrar a través de un embudo de vidrio poroso, desacidificar, lavar con abundante agua destilada hasta neutralidad y terminar la reacción.

10) Para neutralizar el ácido húmico producido por el tratamiento de oxidación, especialmente cuando el residuo contiene una gran cantidad de materia de madera, puede ser necesario tratar el residuo con agua amoniacal al 5% (normalmente sólo 1 a 2 minutos) Limpieza profunda. Este proceso también se puede realizar en un embudo de vidrio poroso.

11) Durante la vibración ultrasónica (50kHz), el residuo acuoso debe transferirse desde el embudo de vidrio poroso al vaso de polipropileno y luego colocarse en un baño ultrasónico, la primera vez sin exceder los 2 minutos. Luego se transfirió nuevamente el residuo a un embudo de vidrio poroso y se lavó con agua para eliminar todas las partículas finas (<8 micrómetros).

12) El método para la segunda producción es el mismo que para la primera producción (paso 8). Después de comprobar la muestra y sus efectos, se puede proceder a la oxidación, vibración ultrasónica u otros tratamientos adicionales si es necesario.

Estos métodos incluyen el tamizado a través de una malla de nailon o poliéster para eliminar todo el exceso de partículas (p. ej., <10 μm, <20 μm, >150 μm) y/o elutriación o centrifugación corta para eliminar partículas grandes y pesadas. El residuo de elutriación se puede colocar en un gran espejo de reloj lleno de agua, se separan las partículas más pesadas y más ligeras y se succionan las partículas más ligeras. La centrifugación a corto plazo es beneficiosa para la separación y sedimentación de partículas de diferentes densidades relativas, y la mayoría de las partículas más ligeras que flotan en la superficie se pueden verter o succionar.

13) Una vez realizado el número requerido de hojuelas, se debe guardar el residuo sobrante. Transfiera estos residuos a viales etiquetados y agregue agua para que se asienten. Luego use una pajita para succionar el exceso de agua, agregue glicerol (disolvente de glicerol) y unas gotas de solución saturada de fenol (esta última puede prevenir la actividad microbiana y el crecimiento de hongos) al vial y ciérrelo.

4.1.3 Otros métodos de procesamiento de sedimentos Cuaternarios

1) Una muestra de 1 cm3 suele ser suficiente para encontrar un conjunto palinomorfo Cuaternario para su estudio. Coloque la muestra en un tubo de centrífuga de polipropileno de 50 ml, agregue muestras estándar como licopodio o eucalipto (para determinar la frecuencia absoluta de polen) y luego agregue aproximadamente 10 ml de ácido clorhídrico al 10%. Cuando cese la formación de espuma (si la hay), agregue aproximadamente 20 ml de solución ácida y coloque el tubo de ensayo en un baño de agua caliente a 90 °C para acelerar reacciones adicionales. Después de centrifugar a aproximadamente 3000 rpm, viértalo y repita varias veces hasta que no se produzcan más burbujas. Luego las muestras se lavaron con agua destilada hasta neutralidad y luego se centrifugaron para acelerar el proceso de neutralización. Además de los pasos 7) y 8) anteriores, en cada lavado se añade una pequeña cantidad de metanol para reducir la densidad relativa y la tensión superficial, lo que se aplica a todo el proceso de análisis.

2) Añadir a la muestra unos 10 ml de solución de hidróxido de potasio o hidróxido de sodio al 10% y bañar en agua caliente a 90°C durante 2 a 5 minutos (tiempo mayor para muestras de turba), si es necesario. Remover. Antes de verter el líquido flotante, se debe registrar el color de la materia flotante en la superficie en una escala de cinco puntos (de claro a oscuro) como unidad de medida del humus. Si es necesario, se requiere una limpieza adicional hasta que la materia flotante en la superficie sea incolora.

3) Si la muestra contiene una gran cantidad de minerales de grano grueso o materia orgánica, se suele lavar con un tamiz de 150μm o 180μm. Después de transferir el residuo que queda en el tamiz a una placa de Petri, examine las semillas, los fragmentos de musgo, el carbón y otros materiales bajo un microscopio binocular, registre su abundancia relativa y guárdelos en botellas de vidrio o plástico.

4) Si hay abundantes minerales arcillosos, añadir unos 30mL de fosfato de sodio al 5% a la muestra, luego agitar y poner en un baño de agua caliente a 90°C durante 10 a 20 minutos, centrifugar. y derramar la superficie de los objetos flotantes. Repita este proceso (generalmente de 3 a 5 veces) hasta que la materia flotante en la superficie no contenga minerales arcillosos y finalmente enjuáguelo con agua destilada.

5) Si la muestra contiene partículas minerales y la reacción es violenta, primero trátela con solo 10mL de ácido fluorhídrico 58% ~ 62%, y luego agregue 10ml de ácido clorhídrico concentrado. Luego agregue más ácido fluorhídrico y póngalo en agua caliente (la temperatura del agua es la misma que la anterior). Dependiendo de la composición de la muestra, el tiempo del baño maría varía de 30 minutos a 2 horas, agitando con una varilla de polipropileno si es necesario. Después de enfriar, centrifugar y eliminar el sobrenadante. Si es necesario, se pueden agregar nuevamente ácido clorhídrico y ácido fluorhídrico y el proceso de descomposición puede durar de 2 a 3 horas. Este proceso se repite varias veces hasta que todos los minerales se hayan descompuesto y la muestra esté neutralizada. Antes de la centrifugación, se añadió metanol a la superficie de la mezcla para evitar que se escapara el ácido.

6) Añadir unos 10mL de ácido acético al residuo, luego agitar, centrifugar y verter. El proceso de deshidratación de la muestra es un requisito previo indispensable para el paso 7), porque la hidrólisis de una mezcla de agua y ácido acético producirá una reacción explosiva.

7) Agregue lentamente una parte (como 20 ml) de ácido sulfúrico concentrado en un vaso de precipitados de polipropileno seco (250 ml) que contenga 9 partes (como 180 ml) de anhídrido acético y siga revolviendo. Luego, agregar con cuidado 10 mL de la mezcla a cada tubo de ensayo (porque no se puede almacenar, la mezcla debe ser hecha nueva), y bañar en agua caliente a 90°C durante 2 min, revolviendo cada 1 min. Después de sacarlo del baño de agua, agregue anhídrido acético a cada tubo de ensayo, centrifugue y deseche cualquier materia flotante en la superficie.

8) Añadir nuevamente 10mL de anhídrido acético, centrifugar y verter el acetato de celulosa soluble producido por la hidrólisis del ácido acético.

9) Después de lavar más con agua destilada hasta que el pH sea neutro (generalmente al menos 5 veces), transfiera el residuo a un tubo de centrífuga cónico de 15 ml, haga tabletas y guárdelas según el método de tratamiento en 4.1.2.

Nota: En términos generales, este procedimiento analítico puede dar resultados satisfactorios cuando se procesan muestras de limolita y lutita con un contenido de materia orgánica relativamente alto. Sin embargo, al analizar materiales cuaternarios, es inevitable realizar los ajustes adecuados en el proceso de análisis. Por ejemplo, hay muy poca materia orgánica en el sedimento, o en realidad no hay nada más que materia orgánica. Si hay muy poca materia orgánica, la muestra a procesar debe ser mucho mayor a 1cm3. Si algunos de los componentes minerales se separan mediante un tamiz para eliminar primero las partículas de arena y arcilla, es posible que se reduzcan los reactivos químicos utilizados para tratar estas muestras. Por otro lado, el procesamiento de la turba está muy limitado por el proceso de hidrólisis del ácido acético.

4.1.4 Turba

Las muestras de turba deben tratarse primero con álcali y luego hidrolizarse con ácido acético. Generalmente se pueden obtener resultados satisfactorios. En el caso de la turba con mayor madurez, la celulosa vegetal que contiene se ha descompuesto parcial o incluso completamente y solo necesita un tratamiento alcalino.

4.1.4.1 Tratamiento alcalino

Los pasos específicos son los siguientes:

1) Añadir <10% de solución acuosa de hidróxido de potasio a 3 ~ 5 g de muestra de turba hasta Sumerja completamente la muestra con el reactivo y hiérvala en un recipiente resistente al calor y a los ácidos (como un vaso de precipitados de vidrio) durante 5 minutos.

2) Añadir agua y aclarar abundantemente hasta que el agua quede clara.

3) Si aparece celulosa vegetal en la muestra o se encuentra protoplasma en el polen, pasar directamente al paso 5) para la hidrólisis del ácido acético. De lo contrario, se puede agregar ácido clorhídrico (30%) al residuo para asegurar la neutralización completa de la base.

4) Añadir agua y lavar bien varias veces.

4.1.4.2 Hidrólisis del ácido acético

Debido a que el reactivo de hidrólisis del ácido acético puede explotar cuando se expone al agua, todos los instrumentos y muestras que se utilizarán deben secarse completamente antes del experimento. Los pasos específicos son los siguientes:

1) Agregar ácido acético glacial al residuo centrifugado para realizar la reacción de deshidratación y verter la materia flotante en la superficie.

2) Agregue reactivo de hidrólisis de ácido acético mezclado nuevo [compuesto de anhídrido acético (CH3CO)2O + ácido sulfúrico concentrado en una proporción de 9:1] en un tubo de centrífuga caliente y revuelva repetidamente para mezclar bien.

3) Colocar al baño maría caliente en agua hirviendo (1~15min).

4) Centrifugar, abrir el grifo y verter con cuidado el líquido transparente del tubo de centrífuga en el depósito de agua.

5) Lavar el residuo con ácido acético glacial, centrifugar y verter el líquido transparente.

6) Añadir agua y lavar bien varias veces. Si la inspección visual muestra que la muestra contiene celulosa vegetal o el polen contiene protoplasma, repita los pasos 1) a 5).

7) El cribado selectivo para eliminar partículas gruesas (el tamaño de malla es de 150 μm o 200 μm, lo que permite el paso de esporas grandes) es una buena forma de concentrar el polen.

Utiliza el método de procesamiento 4.1.2 para crear un vídeo y guardarlo.

4.1.5 Lignito

El proceso de tratamiento del lignito suele incluir un tratamiento de oxidación y un tratamiento alcalino. En ocasiones puede omitirse el tratamiento de oxidación del lignito de baja madurez. Uno de los mejores métodos de inspección es colocar una pequeña cantidad de muestra de lignito en un portaobjetos de vidrio, dejar caer una gota de solución alcalina al 5% ~ 10% y observar la reacción bajo un microscopio: si las partículas se descomponen, la solución alcalina se vuelve oscura. marrón, y si se pueden ver algunas esporas, no es necesario el tratamiento de oxidación. Durante el tratamiento de oxidación, este método también se puede utilizar para comprobar si el material se ha oxidado completamente o si es necesaria una oxidación adicional. La elección del oxidante depende principalmente del grado de carbonificación del material de muestra. Para lignitos de baja madurez, generalmente se utiliza ácido nítrico como reactivo oxidante, con diferentes concentraciones, temperaturas y tiempos de reacción; para lignitos de mayor madurez, se recomienda utilizar la solución diluida de Shure como oxidante fuerte.

4.1.5.1 Tratamiento de oxidación

Los pasos específicos son los siguientes:

1) Coloque 10~20g~20g de material de muestra en 100 ml de ácido nítrico (concentración: 25% ~30%).

2) Dejar hasta que el lignito se descomponga parcialmente o se rompa con facilidad.

3) Añadir agua destilada y dejar la muestra durante unas 24 horas.

4) Enjuagar el residuo con agua varias veces.

4.1.5.2 Tratamiento alcalino

Los pasos específicos son los siguientes:

1) Añadir hidróxido de potasio (concentración inferior al 10%) hasta que la muestra esté completamente Sumergido en la solución alcalina, calentar hasta casi hervir. Si ves que la muestra ha reaccionado, es decir, el líquido se ha vuelto marrón, la temperatura de calentamiento puede ser menor.

2) Añadir agua y lavar bien hasta que el agua quede clara.

3) Añadir ácido clorhídrico (concentración 30%).

4) Añadir agua y lavar bien los residuos varias veces.

5) Si el tipo de espora todavía está rodeado por materia orgánica amorfa masiva durante la inspección, repita los pasos anteriores.

Utiliza el método de procesamiento 4.1.2 para crear un vídeo y guardarlo.

4.1.6 Carbón

El tratamiento de oxidación es el paso más importante en el proceso de procesamiento de muestras de carbón. Los carbones intermedios e incluso los de alta calidad a menudo se oxidan con las soluciones de Shure. Si la madurez del carbón es alta, el ácido nítrico fumante también puede lograr el mismo propósito. Sin embargo, en este caso, el tratamiento alcalino posterior no es necesario, sino que la muestra debe ser halogenada con agua de bromo (Br2) antes del tratamiento de oxidación (ver la sección "Tratamiento de Oxidación"). Existen dos métodos para preparar las soluciones Shure: húmedo y seco. El método húmedo consiste en mezclar una solución saturada de clorato de potasio con dos o tres concentrados en frío (70%) o ácido nítrico fumante (puro), o agregar clorato de potasio (KClO3) al ácido nítrico fumante hasta que se sature. El método seco consiste en mezclar cristales de clorato de potasio o cristales de clorato de sodio con una cantidad igual de carbón y luego agregar de 2 a 3 veces la cantidad de ácido nítrico concentrado. Cabe señalar que aunque el método seco es más rápido que el método húmedo, durante la reacción se producirá ácido cloroso (HClO3), que se autodestruirá una vez que la concentración supere el 30%.

4.1.6.1 Tratamiento de oxidación

Los pasos específicos son los siguientes:

1) Añadir 100 ml de solución de Schure (método húmedo) a 10 ~ 20 g de muestra.

2) Observar la reacción. Si la oxidación es fuerte, se puede agregar agua con cuidado para ralentizar la reacción. Si la reacción es lenta, déjela reposar durante 24 horas o hasta que las pruebas con soluciones alcalinas (ver 4.1.5) muestren que la oxidación está completa. La duración del tratamiento de oxidación depende en gran medida de la naturaleza de la muestra. Se informa que el tiempo necesario para el tratamiento de oxidación con la solución de Schurr varía mucho; por ejemplo, sólo se necesitan 5 M5 minutos para los residuos orgánicos en un determinado tipo de lignito, pero al menos 8 días para el carbón bituminoso. Cuando el tiempo de oxidación sea demasiado largo, se deberá sustituir la solución de Schur cada 24 horas.

3) Añade agua varias veces y enjuaga abundantemente varias veces hasta que el agua quede clara.

4.1.6.2 Tratamiento alcalino

Los pasos específicos son los siguientes:

1) Añadir hidróxido de potasio (concentración < 10%) a la muestra y calentarla. hasta que esté cerca de hervir. Si la reacción se puede observar a simple vista, es decir, el líquido se vuelve marrón, la temperatura de reacción puede ser menor.

2) Después de añadir agua, enjuagar bien hasta que el agua quede clara.

3) Añadir ácido clorhídrico (concentración 30%).

4) Añadir agua varias veces para limpiar en profundidad los residuos.

5) Si el tipo de espora todavía está rodeado de materia orgánica amorfa masiva, repita los pasos anteriores.

Si el tratamiento de oxidación no logra resultados satisfactorios después del proceso anterior, se pueden realizar los ajustes adecuados, como aumentar la proporción de ácido nítrico en la solución de Shure, calentar cuidadosamente el reactivo de oxidación o aumentar la reacción. tiempo. También se pueden utilizar oxidantes más fuertes como el ácido nítrico fumante. Sin embargo, todos estos pasos deben realizarse con extrema precaución. Si la reacción es excesiva, la muestra no es válida.

Utiliza el método de procesamiento 4.1.2 para crear un vídeo y guardarlo.

4.1.7 Descripción

Cada laboratorio puede ajustar el flujo de procesamiento anterior según su propia situación. Sin embargo, no importa qué procedimiento de procesamiento de rutina se adopte o se realicen algunos ajustes al proceso, se debe tener cuidado y todos los pasos deben registrarse cuidadosamente y completarse en su totalidad para evitar el peligro de perder componentes potencialmente valiosos en la muestra. Los resultados obtenidos deben verificarse cuidadosamente, ya que la calidad del análisis y los datos derivados del mismo pueden variar significativamente, lo que puede afectar las conclusiones.

4.2 Requisitos de seguridad para los laboratorios de palinología

La seguridad es lo más importante. Cada plan de análisis de peligros potenciales y método de eliminación de residuos debe discutirse con el personal de seguridad del departamento de protección ambiental correspondiente. Se deben seguir estrictamente todas las normas de seguridad y se deben dominar los procedimientos de emergencia en caso de derrames accidentales de reactivos químicos peligrosos antes de analizar muestras de polen. Se debe usar ropa protectora en todo momento durante los experimentos y la mayoría de los tratamientos químicos deben realizarse en una campana extractora. Especialmente durante los procesos de ácido fluorhídrico, oxidación e hidrólisis del ácido acético, se deben usar guantes protectores de goma, mangas cortas, delantales y mascarillas. Cuando utilice ácido fluorhídrico, por muy diluido que esté, nunca apague los ventiladores ni enjuague el sistema. El laboratorio debe estar equipado con equipo de lavado de emergencia.

Los experimentadores que participan en el análisis de esporopolen deben someterse a una estricta formación especializada y estar familiarizados con diversos procesos de análisis, las características de diversos productos químicos, el rendimiento de diversos equipos de análisis, las normas de seguridad del laboratorio y los planes de emergencia del laboratorio. El personal del laboratorio de análisis de polen debe tener amplios conocimientos y habilidades competentes. Las secciones microscópicas obtenidas mediante técnicas analíticas deficientes no sólo son difíciles de estudiar sino también insatisfactorias porque los datos obtenidos no son fiables.

4.3 Tecnología de microscopía óptica de transmisión

La microscopía óptica de transmisión es la técnica más tradicional para estudiar el esporopolen fósil, y también es la técnica más utilizada en la identificación rutinaria de fósiles de esporopolen. Si la muestra es transparente, esta técnica permite una observación cuidadosa de la estructura superficial y los patrones del polen, mostrando claramente la estructura interna del polen.

Existen muchos tipos de microscopios ópticos de transmisión, algunos de los cuales han demostrado ser muy eficaces a la hora de estudiar algunos materiales palinológicos fósiles. Las marcas de microscopios habituales incluyen Leica, Nikon, Zeiss y Olympus.

Se suele utilizar oculares de 10x, objetivos de 40x o 100x (inmersión en aceite). El conteo convencional es 400 veces y la identificación de claves requiere un aumento de 1000 veces. Para localizar con precisión y estudiar en detalle algunos palinomorfos importantes, se requiere una platina de vidrio con una regla móvil. En los últimos años, el "England Finder Slide" se ha convertido en el método de posicionamiento más popular porque puede determinar las coordenadas precisas de una muestra en un portaobjetos delgado, independientemente del modelo de microscopio utilizado.

Para una observación y fotomicrografía detalladas, el microscopio debe ajustarse cuidadosamente para garantizar la luz, el brillo, el contraste y la profundidad de campo adecuados. La mayoría de los microscopios de investigación se pueden utilizar para fotomicrografía (sistemas de imágenes ópticas y digitales).

4.4 Tecnología de microscopía electrónica

4.4.1 Microscopía electrónica de barrido

La microscopía electrónica de barrido se ha convertido en uno de los métodos de observación y fotomicrografía del esporopolen. Tiene las características de alta resolución y gran cantidad de información, y puede proporcionar científicamente imágenes de esporopolen tridimensionales y de máxima profundidad de campo.

Existen dos métodos para preparar muestras de microscopio electrónico de barrido: ① Adherir directamente los residuos orgánicos que contienen esporopolen analizados en el laboratorio a la base del microscopio electrónico; ② Colocar una pequeña cantidad de residuos orgánicos que contienen esporopolen y agua. colóquelo en un portaobjetos (sin cubreobjetos) y obsérvelo bajo un microscopio óptico. Tome una fotografía de las partículas de esporopolen que se van a estudiar bajo el microscopio óptico. Luego use un cepillo fino para seleccionar las partículas de esporopolen designadas para estudiarlas y péguelas. ellos en el microscopio electrónico. Tome asiento. El primer método requiere poco tiempo para preparar las muestras, pero puede haber ciertas desviaciones en la clasificación y los estudios comparativos. El segundo método lleva mucho tiempo preparar las muestras y los resultados del análisis son muy precisos. Este método se utiliza a menudo en estudios palinológicos sistemáticos.

Existen muchos adhesivos disponibles para adherir muestras a la base de un microscopio electrónico de barrido. La elección del adhesivo depende de la naturaleza del material, de si es necesario retirarlo de la base del microscopio electrónico, de los requisitos mecánicos del microscopio electrónico y, hasta cierto punto, de las preferencias personales. Preste atención al utilizar adhesivos. Por un lado, debe asegurarse de que el adhesivo tenga suficiente viscosidad pero no se encoja alrededor de la muestra. Por otro lado, debe asegurarse de que el pegamento no sea demasiado pegajoso y dificulte la adhesión de la muestra. .

Las muestras fijadas con pegamento soluble se pueden retirar de la base del microscopio electrónico. El método consiste en utilizar un pincel muy fino humedecido o empapado en disolvente y pasar suavemente entre la muestra y el pegamento. También se pueden extraer con cuidado muestras individuales de la base del microscopio electrónico de varias muestras.

Los soportes para microscopios electrónicos se almacenan mejor en un ambiente seco, sellado, libre de polvo y con temperatura relativamente controlada. Existen unas pequeñas cajas diseñadas para almacenar varios tipos de soportes para microscopios electrónicos. El soporte del microscopio electrónico debe colocarse en un estante, y cada compartimento del estante no puede deslizarse, de modo que incluso si la caja se gira hacia arriba y hacia abajo, el soporte del microscopio electrónico no golpeará la tapa. Coloque cada marco de microscopio electrónico en un plato de vidrio y cúbralo para facilitar su almacenamiento y conservación. Si el desecante se coloca en un plato o caja de vidrio con base para microscopio electrónico, se debe sellar y asegurar para evitar daños a la muestra. Dibuje y etiquete varias muestras en el soporte del microscopio electrónico. Si la dirección del dibujo no es obvia, la base del microscopio debe estar claramente marcada.

4.4.2 TEM

La microscopía electrónica de transmisión es de gran importancia en el estudio de los fósiles de esporopolen y puede proporcionar información útil sobre la ultraestructura de las paredes del tejido del esporopolen. Los mejores materiales para la investigación con microscopía electrónica de transmisión son el esporopolen conservado in situ (esporopolen conservado en las partes reproductivas de las plantas), seguido del esporopolen disperso en sedimentos y el esporopolen analizado en laboratorio.

Si es necesario, es necesario seccionar muchas partículas, y cada grano de polen o espora debe posicionarse con precisión antes de la ultramicrosección.

Hay varias formas de apuntar. Un método consiste en incrustar la muestra en una oblea delgada para que las partículas puedan verse y localizarse cuando se seccionan. Un método alternativo, adecuado para granos de polen pequeños o muestras dispersas, es pipetear los granos de polen sobre un filtro de celulosa y luego cubrir ambos lados del filtro con agar. Deshidratar estos filtros y saturarlos gradualmente con resina en un plato llano otro método es colocar los granos de polen en un pequeño trozo de agar, tratar el trozo de agar con 4% de paraformaldehído y 2% de ácido ósmico, y luego utilizar Deshidratar con diferentes concentraciones; de etanol, luego pasar a óxido de propileno e incrustar con Epon-Araldite.

Se pueden teñir secciones ultrafinas de fósiles palinológicos. Las partículas de palinomorfo se trataron con glutaraldehído y luego con ácido ósmico antes de su inclusión. La tinción se puede realizar después de la sección. Los tintes más utilizados son acetato de uranilo al 2%, solución acuosa de permanganato de potasio al 2% y citrato de plomo al 0,25%.

Los cortadores de vidrio se utilizan principalmente para cortar polen fósil, y el color de las rodajas va desde plateado hasta amarillo dorado. Las herramientas de diamante presentan un rendimiento excelente cuando se requieren estructuras de paredes particularmente finas. Una vez cortadas las rodajas, se pueden recoger utilizando una red ranurada de 1 mm × 2 mm y secar. Hay una película protectora en la red de transporte. Se pueden usar o no diferentes membranas de soporte para partículas palinomorfas de diferentes tamaños. Para obtener imágenes de cortes completas, se pueden preparar algunos cortes en portaobjetos normales, observarlos y fotografiarlos con un microscopio óptico.

Las secciones se pueden observar y fotografiar bajo un microscopio electrónico de transmisión. Debido a la complejidad de la pared del esporopolen y a la falta de imágenes de bajo aumento procedentes de microscopía electrónica de transmisión, en ocasiones es necesario realizar un montaje de fotomicrografías de los granos de esporopolen. Aunque se necesitan múltiples micrografías para formar una imagen "única", dichas micrografías compuestas permiten el análisis de características como la posición de los poros de germinación, la estructura de ajuste y las diferencias en la estructura de la pared desde la perspectiva de todo el grano palinomorfo.

Hasta la fecha, la ultraestructura de los palinomorfos fósiles no ha proporcionado información sobre la biología y evolución de la biota a lo largo de la historia geológica. Aunque existen técnicas estándar fácilmente disponibles para el estudio de palinomorfos fósiles, los investigadores deben adaptar estas técnicas para adaptarse a la pregunta de investigación y la preservación de las muestras.

4.5 Nomenclatura de los fósiles de esporopolen

Si las características principales de los ejemplares fósiles de esporopolen son las mismas que las de un orden taxonómico, se pueden clasificar en este biogrupo si las características principales; de los especímenes fósiles son diferentes Para las características de todos los grupos biológicos conocidos, se debe establecer y nombrar un nuevo orden de clasificación. La denominación de esporopolen debe seguir el Código Internacional de Nomenclatura Botánica (Greuter et al., 1994), y la denominación de esporopolen fósil adopta básicamente el método binomial. Las reglas de denominación son las siguientes:

1) Legitimación El requisito más básico para los nombres palinológicos es la legitimidad, es decir, que cumplan con las normas internacionales de nomenclatura de plantas y sean ampliamente aceptados y utilizados por los paleontólogos.

2) Regla de prioridad. El principio básico del Código Internacional de Nomenclatura Botánica es la regla de prioridad, es decir, la primera publicación válida de la misma unidad taxonómica (género y especie) se nombra como el nombre correcto, y los nombres posteriores (sinónimos) disfrutan de la regla de prioridad. Es importante señalar que la ley de prioridad tiene una "fecha de entrada en vigor" antes de la cual el nombre en disputa deja de ser válido. La ley de prioridad de las plantas fósiles (incluidos los palinomorfos) es 1820 65438 + 31 de febrero (ver Greuter et al., 1994).

3) Clasificación: Los palinólogos deben seguir el Código Internacional de Nomenclatura Botánica para proporcionar un nombre para un taxón. El nombre debe ir acompañado de una descripción correspondiente y "características distintivas" patentadas para aclarar la nueva clasificación. la unidad se diferencia de otros taxones. Las publicaciones de nuevas unidades taxonómicas elegibles (género y especie) deben ir acompañadas de una descripción detallada de las "características" identificativas en inglés o latín, así como fotografías de los objetos físicos. El sistema de clasificación del polen fósil adopta mayoritariamente el sistema de pseudogrupo, es decir, el sistema propuesto por R. Potonié y Kremp. Su método binomial (especies) se establece principalmente en base a la morfología del polen fósil. Imagínese incorporar palinomorfos de todas las épocas en un sistema de clasificación integral, organizándolos bajo un sistema idéntico de unidades taxonómicas. Los palinomorfos se ubican en una serie de niveles taxonómicos diferentes, similares a las diferentes unidades taxonómicas en el sistema de clasificación biológica, pero la terminología comienza con la organización del ejército. La unidad central es Turma, Anteturma se coloca encima, seguida de Subturma. Infraturma, Subinfraturma et al. A través de este sistema, los palinomorfos fósiles recientemente descritos se pueden clasificar en tipos que sean estructuralmente más similares. Esta clasificación se usa ampliamente para la clasificación de palinomorfos Paleozoicos y Mesozoicos, pero tiene poco impacto en los grupos palinomorfos relativamente nuevos (desde el Paleógeno), muchos de los cuales pueden asignarse a familias vivas.

4) Patrón, nombre biológico que se asocia directa o indirectamente a un espécimen biológico o fósil específico. Cada nombre (una unidad por encima de especie, género o familia) tiene un tipo, que es el espécimen en el que se basa en última instancia el nombre. El patrón especificado por el nombre se llama patrón. Si el nominador no especifica un espécimen normal, los académicos posteriores elegirán un modelo de los especímenes en los que se basa el autor, una selección de tipo. Si se pierde todo el material original, se asignará un nuevo tipo a partir del ejemplar reconocido, que represente las características del género y especie. La versión más reciente de las "Reglas Internacionales de Nomenclatura Vegetal" (Greuter et al., 1994) ha realizado importantes reformas a las regulaciones para la adopción de patrones y ha propuesto el concepto de "fenotipo". El llamado molde adjunto significa "cuando existe una ambigüedad obvia entre el molde normal, el molde seleccionado o el molde nuevo previamente especificado, puede elegir un diagrama o leyenda del molde ilustrativo". Este concepto ayudará a las generaciones posteriores de estudiosos a hacer que la denominación sea más rigurosa cuando los especímenes normales seleccionados sean deficientes (quizás mal conservados).

4.6 Almacenamiento

La conservación de muestras de polen se divide en tres partes: ① La conservación de muestras de rocas debe secarse y sellarse de acuerdo con los métodos de conservación de rocas, minerales y fósiles. (2) Preservación de secciones delgadas, colocadas en una caja especial para muestras, en un ambiente relativamente estable, seco y de baja temperatura. ③ Preservación de los residuos de análisis de laboratorio: transfiera los residuos restantes a viales etiquetados, succione el exceso de agua, agregue glicerol (; disolvente de glicerol) y unas gotas de solución saturada de fenol (esta última puede prevenir la actividad microbiana y el crecimiento de hongos), sellar y almacenar en un ambiente relativamente estable, seco y de baja temperatura.

4.7 Transporte

El transporte de fósiles de polen es relativamente sencillo. Ya sean escamas, viales que contienen residuos orgánicos o muestras de rocas, deben estar bien embalados y tener ciertas medidas de protección contra golpes durante el transporte. Al enviar por correo a través de oficinas de correos y departamentos de transporte, los sellos deben tratarse como frágiles y con cuidado. Se recomienda que, en la medida de lo posible, las escamas y los viales que contienen fósiles palinológicos no se transporten por correo, y que se pueda designar a una persona designada para transportarlos con ellos.