Consumibles de columna

La expresión, separación y purificación de proteínas pueden: (1) explorar y estudiar la función de los genes y el mecanismo de regulación de la expresión genética (2) usarse para el estudio de la estructura y la función (3) servir como catalizadores, nutrientes, etc.

Principio del método experimental

En E. coli BL21, el plásmido que porta el gen de la proteína diana se sobreexpresó bajo la inducción de IPTG a 37 °C con cloranfenicol recombinante que porta 6 histidinas consecutivas. residuos de proteína aciltransferasa. Las proteínas se pueden purificar mediante medios cromatográficos en los que los iones de níquel (Ni2) se inmovilizan mediante * * * ácido iminotriacético de acoplamiento de valencia (NTA), que en realidad es cromatografía de afinidad por fusión de metales (MCAC). El grado de purificación de proteínas se puede analizar mediante electroforesis en gel de poliacrilamida.

Materiales experimentales

Escherichia coli BL21

Reactivos y kits

Medio de cultivo líquido LB solución tampón de lavado de ampicilina TampónIPTG agua destilada Levadura peptona pancreática polvo de cloruro de sodio

Instrumentos y consumibles

Agitación centrífuga columna de cromatografía tubo de centrífuga punta de pipeta caja vaso de precipitados varilla de vidrio

Anticuerpo

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CD2 anticuerpo

Anticuerpo policlonal de cadena ligera lambda de cabra

Anticuerpo policlonal C4 del complemento de cabra