¿Qué oligonucleótido tiene mayor valor de absorbancia?

260/280; 260/230 amp; Cuantificación de ácido nucleico El ácido nucleico tiene el pico de absorción más alto a una longitud de onda de 260 nm. La propiedad de absorber la luz ultravioleta la posee el sistema de doble enlace *yoke del anillo de purina y el anillo de pirimidina, por lo que la purina y la pirimidina y todas las sustancias que las contienen, ya sean nucleósidos, nucleótidos o ácidos nucleicos, pueden absorber la luz ultravioleta característica. Sin embargo, el método UV no puede distinguir entre ADN y ARN y sólo puede utilizarse para identificar la pureza y el contenido de los ácidos nucleicos. Las proteínas también absorben la luz ultravioleta porque contienen aminoácidos aromáticos. Generalmente, el pico de absorción de la proteína se encuentra en la longitud de onda de 280 nm y el valor de absorción a 260 nm es una décima parte o menos que el del ácido nucleico. Por lo tanto, cuando el contenido de proteína en las muestras de ácido nucleico es bajo, tiene poco efecto. la medición UV de ácidos nucleicos. La proporción de absorción de 260 nm a 280 nm del ARN es superior a 2,0; la proporción de absorción de 260 nm a 280 nm del ADN es de alrededor de 1,9. La proporción disminuye cuando el contenido de proteína en la muestra es mayor. Cuantificación del ácido nucleico Tanto el ADN como el ARN tienen la propiedad de absorber la luz ultravioleta. Su pico de absorción se encuentra en la longitud de onda de 260 nm. La composición molecular de cada ácido nucleico es diferente, por lo que su coeficiente de conversión es diferente. Para cuantificar diferentes tipos de ácidos nucleicos es necesario seleccionar previamente los coeficientes correspondientes. Por ejemplo: el valor de absorbancia de 1OD es equivalente a 50 μg/ml de ADNds, 37 μg/ml de ADNss, 40 μg/ml de ARN y 30 μg/ml de oligonucleótido. El valor de absorbancia después de la prueba se convierte mediante los coeficientes anteriores para obtener la concentración de muestra correspondiente. Estos se ejecutan mediante el programa preestablecido en el espectrofotómetro. Por lo tanto, antes de realizar la prueba, elija el programa correcto y el tipo de muestra de prueba. Luego pruebe la muestra nuevamente, asegurándose de ingresar el factor de dilución de la muestra. Cómo evitar la deriva de absorbancia Las lecturas inestables pueden ser el mayor dolor de cabeza para los experimentadores. Los instrumentos con mayor sensibilidad exhibirán una mayor deriva de absorbancia. De hecho, el principio de diseño y el principio de funcionamiento del espectrofotómetro permiten que el valor de absorbancia cambie dentro de un cierto rango, es decir, el instrumento tiene cierta exactitud y precisión. Las propiedades físicas y químicas del ácido nucleico en sí, el valor del pH y la concentración de iones del tampón utilizado para disolver el ácido nucleico durante la prueba, una concentración de iones demasiado alta también provocarán una desviación de la lectura. Tampón con un cierto valor de pH y una baja concentración de iones (como TE), que puede mejorar en gran medida la estabilidad del ácido nucleico. El valor de absorbancia de los ácidos nucleicos se ve afectado por el valor del pH y la concentración de iones tampón. Sólo bajo ciertos valores de pH y condiciones de baja concentración de iones (como Tris-HCl 10 mM, pH 8,0) se pueden obtener resultados de detección precisos. El valor del pH del agua es inestable y puede provocar errores de detección. Algunos tampones tienen su propia absorción en el rango UV; para garantizar mediciones precisas, utilice el mismo tampón en el que suspendió o eluyó la muestra.

La concentración de dilución de la muestra también es un factor que no se puede ignorar, porque inevitablemente hay algunas partículas pequeñas en la muestra, especialmente muestras de ácido nucleico. La presencia de estas pequeñas partículas interfiere con los resultados de la prueba. Para minimizar el impacto de las partículas en los resultados de la prueba, se requiere que el valor de absorbancia del ácido nucleico sea al menos superior a 0,1 A, y el valor de absorbancia es preferiblemente 0,1