¿Cuál es el método de limpieza de la columna de cromatografía líquida de alto rendimiento Agilent c18?
En segundo lugar, como columna cromatográfica C18 ordinaria, especialmente una columna cromatográfica C18 ordinaria basada en componentes de fase móvil de gel de sílice, ácido, álcali, sal y agua causará daños a la columna. No debe haber demasiada agua (a excepción de AQ para columnas de agua pura, la mayoría de las marcas tienen columnas impermeables, personalmente creo que mientras el agua en la fase móvil supere los 80, acortará la vida útil del C18). Por lo tanto, al realizar análisis de fase móvil de fases con alto contenido de agua, preste atención a la selección de una columna cromatográfica adecuada. El daño causado por sustancias ácidas a la columna cromatográfica es irreversible y se debe controlar el valor del pH. Personalmente creo que cuando el valor del pH es inferior a 2, se debe preparar la columna. Las condiciones alcalinas son relativamente débiles para la matriz de gel de sílice C18. Generalmente, la matriz de gel de sílice C18 no es muy duradera en condiciones alcalinas, pero ahora existen columnas cromatográficas alcalinas PH11, pero son más caras. El principal impacto de la sal en las columnas cromatográficas es la precipitación de sal, que es fatal.
La tercera cuestión es el método de lavado. Los métodos de lavado deben distinguirse según la fase móvil utilizada y los diferentes métodos de lavado de la muestra. Generalmente, no se agregan sales ácidas ni alcalinas y la fase acuosa no es alta (como agua con metanol 60:40). No se requiere un lavado excesivo. El propósito del lavado es eliminar las impurezas de la muestra. Simplemente guarde la fase móvil. En condiciones ácidas y alcalinas, en principio, el ácido y el álcali deben eliminarse por lavado de la columna cromatográfica y se puede ahorrar agua con metanol (por ejemplo, la proporción de 60:40 se puede determinar según la fase móvil, siempre que la fase acuosa no es lo suficientemente alta). Las condiciones de la sal son problemáticas si no se manejan bien, no sólo la columna cromatográfica tendrá problemas, sino que también el instrumento. La fase móvil comúnmente utilizada es metanol-agua (10:90) para eliminar la sal (preste atención a la presión), luego enjuague con metanol puro (este paso es para restaurar el daño a la columna cromatográfica causado por la fase alta en agua). ), y finalmente almacenarlo en un sistema general de agua con metanol.
El cuarto punto es la presión al lavar. Lo mejor es comenzar con un caudal pequeño y aumentarlo lentamente hasta el rango de presión permitido. Al lavar, el caudal exacto generalmente debe alcanzar entre 10 y 20 veces el volumen de lavado de la columna cromatográfica.