Método de lavado de columna para la columna Agilent HPLC C18
En segundo lugar, como columna C18 ordinaria, especialmente una columna C18 ordinaria con una matriz de gel de sílice, el ácido, el álcali, la sal y el agua son fases móviles que pueden causar daños a la columna. No debe haber demasiada agua (a excepción de la columna de agua pura con AQ, todas las marcas generalmente tienen esta columna impermeable). Personalmente, creo que mientras la fase móvil del agua supere los 80, la vida útil del C18 se acortará. Por lo tanto, al realizar un análisis de fase móvil altamente acuosa, preste atención a la selección de una columna cromatográfica adecuada. El daño ácido a las columnas cromatográficas es irreversible, por lo que se debe controlar el pH. Personalmente creo que cualquiera con un pH inferior a 2 debería estar preparado para desechar la columna. Las condiciones alcalinas son el punto débil de la matriz de sílice C18. El C18 a base de gel de sílice generalmente no es duradero en condiciones alcalinas. Hoy en día, también existen columnas cromatográficas con un pH alcalino de 11, pero son más caras. El efecto de la sal en la columna cromatográfica se debe principalmente a la precipitación de la sal y es fatal.
El tercer método de lavado. Los métodos de limpieza deben distinguirse en función de la fase móvil utilizada y los diferentes métodos de limpieza de la muestra. Generalmente, cuando no se agrega sal ácida o alcalina y la fase acuosa no es alta (como 60:40 metanol-agua), no es necesario un lavado excesivo. El propósito del lavado es eliminar las impurezas de la muestra. Guarde la fase móvil. En condiciones ácidas y alcalinas, en principio, el ácido y el álcali pueden eliminarse por lavado de la columna cromatográfica y almacenarse en agua metanólica (por ejemplo, la proporción de 60:40 se puede determinar de acuerdo con la fase móvil que se utilizará, siempre que ya que la fase acuosa no es alta). Si las condiciones de la sal son problemáticas y no se manejan adecuadamente, no sólo se romperá la columna cromatográfica, sino que el instrumento también resultará problemático. Comúnmente se usa metanol-agua (10: 90) en fase móvil con alto contenido de agua para lavar la sal (preste atención a la presión), luego lavar con metanol puro (este paso es para restaurar el daño a la columna cromatográfica causado por el nivel alto de agua) Y finalmente guárdelo en un sistema de agua con metanol general.
En cuarto lugar, preste atención a la presión al descargar. Es mejor aumentar lentamente el caudal desde un caudal pequeño hasta el rango de presión permitido. El tiempo de lavado y el caudal exacto son generalmente de 10 a 20 veces el volumen de la columna para lavar una columna cromatográfica.