Cómo elegir la placa de cultivo celular adecuada
Las placas de cultivo celular se utilizan comúnmente y son consumibles importantes en experimentos de cultivo celular. Las formas principales son en forma de U y en forma de V, y las especificaciones también incluyen múltiples pocillos de 96, 48 y 24 pocillos. , 12 pocillos, 6 pocillos, etc., con diferentes especificaciones. Los experimentos requieren placas de cultivo celular con diferentes especificaciones y formas. ¿Cómo se elige una placa de cultivo celular, cómo utilizar una placa de cultivo celular y cuáles son sus usos? ¿Diferentes placas de cultivo celular?
Selección de placas de cultivo celular:
Las placas de cultivo celular se pueden dividir en fondos planos y fondos redondos (en forma de U y en forma de V) según las diferentes formas de fondo; los orificios de cultivo son 6, 12, 24, 48, 96, 384, 1536 pocillos, etc., según el material, hay placas Terasaki y placas de cultivo celular ordinarias. La selección específica depende del tipo de células cultivadas, el volumen de cultivo requerido y los diferentes propósitos experimentales.
(1) La diferencia y selección entre placas de cultivo de fondo plano y de fondo redondo (en forma de U y en forma de V):
Las placas de cultivo de fondo plano se utilizan generalmente para células adherentes.
El tipo V se utiliza generalmente para el cultivo de células en suspensión.
Las placas de cultivo en forma de U también se utilizan principalmente para cultivar células en suspensión.
Las placas de cultivo tipo V se utilizan en ocasiones para experimentos de hemaglutinación inmunológica.
Los tableros de diferentes formas naturalmente tienen diferentes usos. Se puede utilizar cualquier tipo de células de fondo plano, pero cuando el número de células es pequeño, como cuando se realiza una clonación, se utiliza una placa de fondo plano de 96 pocillos. Además, cuando se realizan experimentos como MTT, de fondo plano. Las placas se utilizan generalmente independientemente de que sean células adherentes o suspendidas. En cuanto a las placas en forma de U o V, generalmente sólo se utilizan bajo ciertos requisitos especiales. Por ejemplo, en inmunología, cuando se mezclan y cultivan dos linfocitos diferentes, deben estar en contacto entre sí para su estimulación. Por lo tanto, generalmente se requiere una placa en forma de U porque las células se acumularán en un rango pequeño debido a la gravedad. Las placas en forma de V tienen menos usos. Generalmente se utilizan en experimentos de destrucción celular. Para acercar las células objetivo, a menudo se utilizan placas en forma de V. Sin embargo, este tipo de prueba también se puede reemplazar por placas en forma de U. placas (después de añadir las células, centrifugar a baja velocidad)
Si es para cultivo celular suele ser de fondo plano. Además se debe prestar especial atención al material La marca%26quot;Tejido. El %26quot;tratado con cultivo (TC) es para cultivo celular.
No he oído hablar de los de fondo redondo que se utilizan para cultivar células. Los de fondo redondo se suelen utilizar para análisis, reacciones químicas o conservación de muestras, porque los de fondo redondo absorben mejor los líquidos de forma limpia, mientras que los de fondo plano no son fáciles de absorber. Sin embargo, si deseas medir el valor de absorbancia, debes comprar uno de fondo plano.
La mayoría de los cultivos celulares utilizan placas de cultivo de fondo plano, que son convenientes para la observación bajo el microscopio, tienen un área inferior clara y el nivel de líquido del cultivo celular es relativamente consistente y también son convenientes para la detección de MTT.
Las placas de cultivo de fondo redondo se utilizan principalmente para experimentos de incorporación de isótopos, que requieren un recolector de células para recolectar células para el cultivo, como% 26ldquo; cultivo mixto de linfocitos% 26rdquo;, etc.
(2) Colección de preguntas
P: Vi que las placas de cultivo vienen en tamaños de 4, 6, 12, 24, 48 y 96 pocillos, pero no lo sé. para qué experimentos se utilizan. Qué especificaciones, por favor avise.
Respuesta: Depende de sus requisitos experimentales específicos. La citometría de flujo generalmente usa 6 orificios, MTT generalmente usa 96 orificios, la propagación celular generalmente usa 24 orificios, etc. ¡Depende de su experimento!
P: ¿Algún experto sabe qué tipo de placa de cultivo es la placa de Terasaki y en qué se diferencia de las placas de cultivo celular comunes? ¡¡Gracias!!
Respuesta: La placa de Terasaki se utiliza principalmente para investigaciones cristalográficas. Diseñado para facilitar la observación de cristales y el análisis estructural. Hay dos métodos: sentarse y entregar la gota. La apariencia y estructura de los productos utilizados por los dos métodos también son diferentes. Para los materiales, elija polímeros de clase cristalina. Los materiales especiales son beneficiosos para observar la estructura cristalina.
Las placas de cultivo celular están fabricadas principalmente de material PS. El material es una superficie tratada. Facilita la unión, el crecimiento y la expansión celular. Por supuesto, también existen materiales de crecimiento para células planctónicas, así como superficies de baja unión, en lo que respecta a aplicaciones de materiales más experimentales y a la selección de materiales.
P: Quiero utilizar un lector de microplacas para medir la absorbancia. ¿Está bien utilizar una placa de cultivo celular de varios pocillos? ¿Cuál es la diferencia entre un lector de microplacas y una placa de cultivo celular de varios pocillos?
Respuesta: Utilice una placa de cultivo celular de varios pocillos. Las placas de cultivo celular ciertamente se pueden usar para medir la absorbancia y, a menudo, las usamos para la cuantificación de proteínas y la detección de MTT de muestras.
Diferencia: las placas de ELISA son generalmente más caras que las placas de cultivo celular. Las placas de células se utilizan principalmente para el cultivo celular, pero también se pueden utilizar para medir la concentración de proteínas. Las placas de ELISA incluyen placas de recubrimiento y placas de reacción; generalmente no se puede utilizar para el cultivo celular, principalmente detecta proteínas después de una reacción ligada a inmunoenzimas, lo que requiere requisitos más altos y soluciones de trabajo marcadas con enzimas específicas. El siguiente es un ejemplo del uso de una placa de enzimas para detectar anticuerpos IgM/IgG contra el coronavirus:
Pasos de la operación
1 Agregue la muestra: agregue 100 ul (o 2 gotas) de diluyente de muestra a. el recubrimiento en la placa (reservar 2-5 pocillos para controles negativos, positivos y en blanco), diluir el suero a probar con PBS o solución salina fisiológica a 1:20 y agregar 10ul al pocillo de reacción.
2. Añadir controles: Añadir 1-3 pocillos de control negativo, 1 pocillo de control positivo y 100ul de suero control en cada uno. Deje 1 pocillo vacío para el control en blanco.
3. Incubación: Agite la placa de reacción para mezclar las muestras, luego colóquela en una incubadora a 37°C o en un baño de agua durante 20 minutos.
4. Lavar la placa: Diluir 15ml de solución de lavado concentrada hasta 300ml con agua destilada.
(1) Lavado de manos: Vierta el contenido de los pocillos de la placa de reacción, llene los pocillos de reacción con la solución de lavado, déjelo durante 30 segundos, sacúdalo, repita esto 5 veces y seque. .
(2) Lavado a máquina: 5 veces, inyecte 200 ul de solución de lavado en cada orificio o llénelo, déjelo durante 30 segundos, luego absorba y seque.
5. Agregue una solución de trabajo marcada con enzima: agregue 100 ul (o 2 gotas) de solución de trabajo marcada con enzima a cada pocillo, colóquelo en una incubadora a 37 °C para que reaccione durante 20 minutos, luego lave el placa 5 veces. La operación de lavado es la misma que en el paso 4.
6. Desarrollo del color y finalización de la reacción: agregue 50 ul (o 1 gota) de cada una de las soluciones de sustrato A y B al pocillo de reacción y desarrolle el color durante 10 minutos a 37 °C en la oscuridad. Agregue 50 ul (o 1 gota) de solución de parada a cada pocillo y mezcle bien para finalizar la reacción.
Juicio de resultados
1. Configure la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm, primero use un blanco a cero y luego mida el valor de DO de cada pocillo si realiza una medición de longitud de onda dual; Se utiliza, no es necesario establecer un orificio de control en blanco.
2. Cuando el valor OD promedio del control negativo es menor que 0,08 y el valor OD del control positivo (pc) es mayor que 0,30, significa que el kit es efectivo y la operación experimental es buena. correcto. De lo contrario, se debe repetir la prueba.
3. Valor crítico (CUT%26mdash;OFF VALUE)=0,15+valor OD promedio de control negativo (NC) (cuando el valor OD promedio negativo es inferior a 0,05, se calcula como 0,05; cuando el El valor OD promedio negativo es mayor que O calculado según el valor real cuando es igual a 0,05).
4. El valor de OD de la muestra es %26le; el valor crítico es negativo y el valor de OD de la muestra es %26gt;
El área del fondo de los pocillos de diferentes placas de cultivo y la cantidad recomendada de líquido agregado: el nivel de líquido del medio de cultivo agregado en diferentes placas de pocillos no debe ser demasiado profundo, generalmente en el rango de 2-3 mm, combinado con el área del fondo de diferentes pocillos, se puede calcular la cantidad adecuada de líquido agregado a cada pocillo de cultivo. Si se agrega demasiado líquido, el intercambio de gas (oxígeno) se verá afectado y se desbordará fácilmente y causará contaminación durante el movimiento. La densidad celular específica añadida se puede controlar de forma flexible según el propósito del experimento.
Área del recipiente de cultivo (cm2) Volumen del medio de cultivo (ml) Volumen celular
Placa de cultivo de 96 pocillos 0,32 0,1 10e5
Placa de cultivo de 24 pocillos 2 1,0 5% 26 veces;10e5
Placa de cultivo de 12 pocillos 4,5 2,0 10e6
Placa de cultivo de 6 pocillos 9,6 2,5 2,5%26 veces;10e6
Plato de cultivo de 3,5 cm 8 3,0 2% 26 veces;10e6
Placa de Petri de 6 cm 21 5,0 5,2%26 veces;10e6
Placa de Petri de 10 cm 55 10,0 13,7%26 veces;10e6
Frasco de cultivo de 25cm2 25 5.0 5%26veces;10e6
Bote de cultivo de 75cm2 75 15～30 2%26veces;10e7