¿Cómo determinar el contenido de aspirina?
Las tabletas de aspirina son fármacos antipiréticos y analgésicos de uso común y están incluidas en el segundo volumen de la "Farmacopea China" (Farmacopea China, edición de 2000). . El método original de determinación del contenido es el método de titulación por neutralización ácido-base. Entre los fármacos antipiréticos y analgésicos actualmente en el mercado, muchos contienen aspirina o fármacos tipo aspirina. Además de los métodos de determinación del contenido originales de la Farmacopea China, existe una variedad de métodos de determinación del contenido para cada forma farmacéutica. Si se utiliza cromatografía líquida de alta resolución para determinar su contenido, se pueden eliminar las interferencias de otras sustancias que contienen ácidos y álcalis en su determinación y se puede controlar más eficazmente la calidad de la preparación. Este método es simple de operar, tiene una gran especificidad y una alta precisión. También existen métodos de cálculo de modelos matemáticos, como la tecnología de reflectancia difusa del infrarrojo cercano. El principio es utilizar la quimiometría para establecer una relación matemática entre los valores característicos espectrales (como la absorbancia) y los componentes a medir (denominados modelos matemáticos). ) basado en el espectro de infrarrojo cercano de muestras concentradas )
1 Determinación del contenido de aspirina en aspirina y preparaciones de aspirina
Existen muchos métodos para determinar el contenido de aspirina en aspirina y. preparados de aspirina, incluidos los ácidos y bases contenidos en la farmacopea y el método de titulación
Y espectrofotometría UV, cromatografía líquida de alta resolución, etc.
1.1 Método de titulación ácido-base de aspirina:
Método de titulación directa: Método: Tomar 0,4 g de este producto, pesarlo con precisión, añadir 20 ml de etanol neutro, después de disolver añadir fenolftaleína. Solución indicadora 3d, valorar con valorante de hidróxido de sodio (0,1 mol/l). Cada 1ml de valorante equivale a 18,02mg C9H8O4
Titulación del residuo después de la hidrólisis: Método: Tomar 1,5g de este producto, pesarlo con precisión, agregar 50,0ml de valorante de hidróxido de sodio (0,5mol/l), Mezclar bien, hervir a fuego lento durante 10 minutos, enfriar, agregar una solución indicadora de fenolftaleína y valorar el hidróxido de sodio restante con un valorante de ácido sulfúrico (0,25 mol/l).
Método de titulación en dos pasos: tomar 10 comprimidos de este producto, pesarlos con precisión, molerlos finamente, pesar con precisión una cantidad adecuada de comprimido en polvo (aproximadamente equivalente a aspirina), añadir 20 ml de etanol neutro y agite para disolver la aspirina, agregue la solución indicadora de fenolftaleína durante 3 días y, gota a gota, agregue el valorante de hidróxido de sodio (0,1 mol/l) hasta que la solución se vuelva rosa. Añadir un exceso cuantitativo de 40 ml de valorante de hidróxido de sodio (0,1 mol/l), calentar y agitar en un baño de agua durante 15 minutos, enfriar rápidamente a temperatura ambiente y valorar el álcali restante con valorante de ácido sulfúrico (0,05 mol/l). . Calcule el contenido en función del volumen y el título del valorante consumido
1.2 Determinación con electrodos de preparaciones de aspirina
Instrumentos y reactivos: el potencial del electrodo y la acidez de la solución se prueban utilizando un medidor digital de acidez pH-loC medidor de iones. El electrodo de referencia era un electrodo de calomelanos saturados 232, los reactivos eran de calidad analítica y el agua experimental era agua desionizada destilada después del tratamiento con permanganato de potasio. Los reactivos eran de grado analítico y el agua experimental fue agua desionizada tratada y destilada con permanganato de potasio.
Preparación del electrodo: disolver el material portador 20 mg de octoato de tribencilestaño, 0,33 g de cloruro de polivinilo (PVC) y el plastificante 0,65 g de éter o-nitrofeniloctilo en 3 g de tetrahidrofurano (THF) y agitar. Después de la clarificación, verterlo sobre una placa de vidrio horizontal de 40 mm × 40 mm. Después de que el THF se evapora completamente (aproximadamente 1,2 h), se obtiene una película de PVC elástica. Utilice una perforadora para cortar un disco de 10 mm de diámetro, péguelo en un extremo de la varilla del electrodo de PVC con una solución de THF que contenga 5 PVC, déjelo durante varias horas, déjelo secar y luego inyecte 0,1 mol/L. ácido salicílico en la varilla del electrodo. La solución de sodio se utiliza como solución de referencia interna, y la línea Ag/AgCl se utiliza como electrodo de referencia interno y se exporta al medidor de iones. El electrodo se debe remojar en una solución de salicilato de sodio de 0,01 mol/L durante 2 horas para activarlo antes de su uso. Cuando no se utilicen durante un período prolongado, los electrodos y las membranas de repuesto se pueden limpiar. Almacenar en ambiente de nitrógeno. En estas condiciones, el rendimiento del electrodo es estable durante al menos 5 meses.
Análisis de preparados de aspirina: Procesamiento de las muestras a analizar: La aspirina se hidroliza fácilmente para obtener iones salicilato, y la reacción es cuantitativa.
Por lo tanto, el contenido de aspirina en la muestra se puede determinar midiendo los iones salicilato. El método de procesamiento de las tabletas de aspirina (A) y las tabletas de aspirina compuesta (B) es el siguiente: tomar una cantidad adecuada del fármaco (10 tabletas) y triturarlo hasta convertirlo en polvo, pesar entre 1 y 1,5 g, calentar y refluir en 25 ml de 0,5 solución mol/L de NaOH durante 1 hora y luego filtrar, ajustar el volumen a 250 ml. Absorber 10 ml del filtrado, ajustar el valor de pH a 5,5 con ácido sulfúrico diluido, luego ajustar el volumen a 250 ml con solución tampón de fosfato con un valor de pH de 5,5 y luego ajustar el valor de pH a 5,5 con ácido sulfúrico diluido. El filtrado se ajustó a pH 5,5 con ácido sulfúrico diluido y luego se ajustó a 100 ml con tampón fosfato a pH 5,5 como solución a enjuagar. Las concentraciones de los fármacos A y B se determinaron utilizando el método de solución estándar y el método de adición de muestra, respectivamente. Determinar la concentración de iones salicilato en las muestras obtenidas después del tratamiento de los fármacos A y B respectivamente, y obtener el contenido de aspirina en el fármaco mediante conversión
1.3 Determinación de comprimidos de aspirina mediante cromatografía líquida de alta resolución
Instrumentos y reactivos: estación de trabajo de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC); Columna: columna ODS C18 (150 mm x 4,6 mm, empaquetadura: Kromasil, tamaño de partícula: 5 μm). Reactivos Sustancia de referencia aspirina, metanol (reactivo cromatográficamente puro), ácido acético glacial, ácido clorhídrico (reactivo analíticamente puro).
Tomar 20 comprimidos de este producto, pesarlos con precisión, molerlos finamente, pesar con precisión una cantidad adecuada (equivalente a 10 mg de aspirina), ponerlo en un frasco medidor de 100 m1, agregar 0,1 mol/L de ácido clorhídrico. solución y utilizar ultrasonido para disolver la aspirina. Enfriar a temperatura ambiente, agregar 0,1mol/l de solución de ácido clorhídrico para diluir hasta la marca, agitar, filtrar, medir con precisión 5m1 de filtrado, colocarlo en un matraz aforado de 25m1, agregar 0,1mol. /l de ácido clorhídrico, ácido clorhídrico (reactivo analíticamente puro) y uso Diluir con 0,1mol/l de ácido clorhídrico. Agregue una solución de ácido clorhídrico de 0,1 mol/L para diluir hasta la marca, cuadricule, inyecte 20 ul en el cromatógrafo líquido y registre el cromatograma. Tome otra cantidad adecuada de sustancia de referencia de aspirina, agregue 0,1 mol/L de solución de ácido clorhídrico para disolverla y dilúyala para obtener una solución que contenga aproximadamente 20 ul de aspirina por litro m1, tome 20 ul de la misma manera. Calcule el área del pico según el método estándar externo.
1.4 Determinación de trazas de ácido acetilsalicílico mediante fotometría cinética
Principio: el yodo tiene un efecto catalítico obvio en la reacción redox de Ce4 y As, y el ácido acetilsalicílico y el yodo se reemplazan fácilmente La reacción reduce la concentración de yodo y debilita el efecto catalítico del yodo, estableciendo así un nuevo método para la determinación de trazas de ácido acetilsalicílico mediante fotometría cinética.
Instrumentos y reactivos: espectrofotómetro 721; acidómetro PHS-3C; baño María a temperatura súper constante. 0,01 mol/lCe(SO4)2 0,013 mol/l AS2O3, 5 mol/l H2S04, 5 mg/l KI diluir a 0,25 mg/l ácido acetilsalicílico; La solución estándar se diluye hasta la concentración requerida; 5 acetato de estricnina; el agua experimental es agua bidestilada.
Método experimental: agregue con precisión 1,0 m1 de solución de KI de 0,25 mg/l, 1,25 m1 de solución de H2S04 de 5 mol/l, 1,0 ml de solución de AS2O3 de 0,013 mol/L y una solución estándar de ácido acetilsalicílico en un colorimétrico de 25 m1. tubo (o solución de muestra), agregue agua destilada hasta la marca de 25 m1. Agite bien y póngalo en un baño de agua a 35 ± 0,1 grados. Después de una temperatura constante, agregue 1,0 ml de 0,01 mol/L de Ce [S04)2, agite bien inmediatamente y vuelva a colocarlo rápidamente en el baño de agua. Después de 10 minutos de reacción, añadir 0,5 mol/L y 0,5 acetato de estricnina para terminar la reacción, desarrollar color con Ce4-, colocar en un baño de agua hirviendo durante 3 minutos, sacar y enfriar a temperatura ambiente. Utilice una cubeta de 1 cm con una longitud de onda de 520 nm y agua destilada como referencia para medir la absorbancia A.
2. Determinación del contenido de la aspirina como fármaco principal
Aunque los componentes de la aspirina son diferentes, la mayoría de ellos se separan y determinan en función de las propiedades químicas o cromatográficas de la aspirina.
2.1 Determinación del contenido de aspirina en comprimidos de aspirina codeína mediante cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa
Instrumentos y reactivos: cromatógrafo líquido HP-1050 y detector UV, dispositivo integral HP3396. Sustancia de referencia fosfato de codeína, sustancia de referencia aspirina. El metanol, el acetato de sodio y el ácido acético glacial son reactivos analíticamente puros y se utiliza la preparación del compuesto de fosfato de codeína y aspirina (producto de prueba).
Condiciones de LC: columna ODS C18 (10 mm, 300 mm x 4 mm); fase móvil: metanol-0,03 mol/l de acetato de sodio (ácido acético glacial para ajustar el pH=3,5) (1:2,5) ; longitud de onda de detección: 280 nm; caudal: 1 ml/min: 1 ml/min.
Método
Preparación de la solución de referencia mixta: Pesar con precisión una cantidad adecuada de sustancia de referencia de fosfato de codeína que se seca a 105 °C hasta obtener un peso constante. Disolver en agua para preparar una solución con una concentración de 0,8 mol/L. Pesar con precisión aproximadamente 40 ml de control de aspirina en un matraz volumétrico de 10 ml. Agregue 2-3 ml de metanol. Después de disolver, agregue 1,0 ml de la solución de fosfato de codeína anterior, agregue agua hasta la marca y agite bien.
Preparación de la solución de prueba: Pesar con precisión la muestra en polvo (aproximadamente equivalente a 8 mg de fosfato de codeína y 400 mg de aspirina) en un matraz aforado de 100 mL, agregar 50 mL de solución de metanol 25, disolver con ultrasonido durante 5 min y diluir con solución de metanol 25. Hasta la marca, la rejilla está pareja. Filtrar a través de una membrana microporosa de 0,45 µm y tomar el filtrado como solución de prueba.
Medición: Tome con precisión 10uL de cada solución de referencia mezclada y solución de prueba, inyéctelas en el cromatógrafo líquido respectivamente y mida sus áreas de pico. Registre el área del pico. Con base en las áreas de los picos de fosfato de codeína y aspirina en la solución de referencia mixta, calcule el contenido de ambos en la solución de prueba.
2.2 Determinación del espectro del índice de refracción ultravioleta de comprimidos antipiréticos pediátricos
Principio: El método de análisis de la curva de plegamiento es un método de transformación matemática (su propiedad matemática es un nuevo tipo de transformación derivada compleja) . Pondera la curva de absorción espectral como varios componentes matemáticos basados en el principio del análisis armónico. Dado que proporciona una gran cantidad de información y puede mostrar diferencias sutiles en las curvas de absorción y reducir las correlaciones matemáticas de componentes similares, tiene ventajas obvias en la caracterización de sustancias y la cuantificación de mezclas.
Instrumentos y reactivos: espectrómetro de falda tipo W UV/visible y software de espectrómetro de falda; aspirina (1) sustancia de referencia (99,89), fenobarbital (2) sustancia de referencia (99,92) y excipientes (Jiamusi Chemical Pharmaceutical Factory). ); Tabletas antipiréticas pediátricas
Métodos y resultados: Preparación de la solución de sustancia de referencia: Pese con precisión las sustancias de referencia 1 y 2, agregue las cantidades adecuadas y agregue 0. Disuelva una cantidad adecuada con una solución de NaOH (disolvente) de 0,1 mol/l y dilúyala hasta obtener una solución madre de 1 mg/m1. Luego dilúyalo con disolvente hasta obtener una solución de concentración adecuada (aproximadamente 120 ug/m1, 22,0 ug/m1, de modo que la tasa de absorción de 1 y 2 sea aproximadamente 0,2-0,8) y reserve. Prepare la muestra de simulación de acuerdo con la proporción de prescripción de medicamentos estándar local original de la provincia de Heilongjiang. Pese 1 y 2 y mezcle con una cantidad adecuada de excipientes. Pese con precisión 0,2 g en un vaso de precipitados pequeño, disuélvalo en el disolvente y diluya hasta 100 m1, déjelo reposar. durante 10min, luego tomar 5m1 y diluir a 250m1. Aspire 16, 17, 18, 19 y 20 m1 en un matraz de 25 m1 respectivamente y fíjelos con disolvente para formar una solución de muestra simulada con una concentración de 10-25 ug/m1 y una concentración de 2,0-2,5 ug/m1 (realice la absorción de 1 y 2 tasa entre 0,2-1,2), **** 5 copias.
Medición de la muestra: Tomar 12 tabletas de este producto, pesarlas con precisión, molerlas finamente, pesar con precisión una cantidad adecuada de polvo fino (equivalente a aproximadamente 10.110 g, 20.011 g) y disolverla en una solución. con un volumen de 50m1 con una pequeña cantidad de disolvente.
Seleccione según el intervalo de plegado óptimo (245-295 nm) según el método "2.3". Seleccione el intervalo de refracción óptimo (245-295 nm) según el método descrito en "2.3", recopile automáticamente la información espectral en este intervalo a través del espectro de refracción y utilice el software del sistema de análisis cuantitativo de dos componentes para realizar la operación de zócalo para calcular el contenido.
2.3 Determinar el contenido de arginina aspirina utilizando tecnología de reflectancia difusa del infrarrojo cercano
Principio: el análisis cuantitativo del infrarrojo cercano requiere medir un conjunto de muestra estándar de componentes conocidos (denominado un conjunto de muestra estándar). De acuerdo con el conjunto de muestras estándar (denominado conjunto de muestras estándar), el método quimiométrico se utiliza para establecer la relación matemática entre los valores característicos espectrales (como la absorbancia) de las muestras del conjunto de muestras estándar en el espectro infrarrojo cercano. y la composición de los componentes a medir (denominado modelo matemático). Al medir una muestra desconocida, solo necesita medir el espectro del infrarrojo cercano de la muestra y luego usar un modelo matemático para predecir el contenido del componente que se va a medir. A diferencia del análisis cuantitativo espectral tradicional, las muestras utilizadas en los espectrómetros de infrarrojo cercano se pueden analizar sin tratamiento previo y el modelo matemático se establece resolviendo la matriz espectral y la matriz de concentración del componente que se va a medir para realizar el análisis cuantitativo. Generalmente, se utiliza la tecnología de reflexión difusa para detectar muestras sólidas y el método de transmisión para detectar muestras líquidas. Los principales métodos para establecer modelos matemáticos incluyen: método de regresión lineal múltiple, método de componentes principales, método de mínimos cuadrados parciales, etc. El algoritmo de pegado es una tecnología de procesamiento de datos multivariante relativamente nueva. Es significativamente diferente de la regresión por pasos y la regresión de componentes principales. Al considerar la longitud de onda de la región del espectro completo, es decir, los parámetros espectrales, también considera la relación entre los componentes internos. de la muestra que se analiza, por lo que se ha utilizado ampliamente en el análisis del infrarrojo cercano.
Instrumento: espectrómetro de infrarrojo cercano Bruker VECTOR22/N, el rango de longitud de onda de la sonda de fibra óptica de difusión es 4000-11000 cm-1
Muestra: arginina aspirina en polvo sólido, que contiene aspirina 48,0-53,0, Éster de sacarosa (excipiente en tableta, como lubricante)
Método experimental: 1/1000 Pesar con precisión la muestra utilizando una balanza de torsión. Pese con precisión 10 partes de arginina aspirina y éster de sacarosa en diferentes proporciones en una balanza de 1000 torque, mézclelos por separado y presiónelos con una prensa para tabletas para obtener tabletas con diferentes contenidos de arginina aspirina (este contenido es el contenido teórico exacto de las tabletas de aspirina). ), 100 comprimidos cada uno. Seleccione al azar 10 tabletas de cada una de las 100 tabletas. Utilice la sonda de fibra óptica de reflexión difusa del instrumento para medir el frente y la parte posterior de cada tableta una vez y tome el espectro promedio como espectro de muestra. El rango de escaneo es de 4000-11000 cm-1 y la resolución es de 8 cm-1. Las mediciones se analizaron mediante el software quant/2 de Bruker y los datos espectrales se preprocesaron con una corrección de dispersión para eliminar errores debidos a diferencias en las superficies de las tabletas.
2.4 Determinación del contenido de sal de arginina aspirina inyectable
Instrumentos y fármacos de prueba: Instrumento agitador electromagnético de 79 l; espectrofotómetro UV-visible. La arginina, la aspirina y otros reactivos son de grado analítico.
Curva estándar: Pesar 250,0 mg de cristal de aspirina, suspenderlo en 250 ml de agua destilada, agitar continuamente en un baño de agua a 40-50 grados hasta que se disuelva, enfriar y transferir a un matraz medidor de 500 ml, agregar agua destilada hasta la marca Agite bien. Extraiga con precisión 1, 2, 3, 4 y 5 ml en matraces de 50 ml respectivamente, agregue 25 ml de agua destilada, ajuste el pH a 9-10 con una solución de NaOH 0,1 mol/L, caliente en un baño de agua hirviendo durante 5 minutos. después de enfriar, use una solución de NaOH de 0,1 mol/L. Ajuste el pH de la solución de ácido clorhídrico L a 3,0-4,0, agregue 5 gotas de solución indicadora de sulfato férrico de amonio, agregue agua destilada hasta la marca y agite bien. Se midió la absorbancia A a 530 nm y la regresión lineal produjo la ecuación.
Determinación del contenido: Pesar 400,0 mg de sal de aspirina y arginina en un frasco medidor de 100 ml, agregar agua destilada para disolver, diluir hasta la marca, agitar bien y filtrar.
Tome 5 ml del filtrado, colóquelo en un matraz aforado de 50 ml, caliéntelo en un baño de agua hirviendo durante unos minutos, agregue 25 ml de agua destilada después de enfriarlo, procese bajo la misma curva estándar, mida la absorbancia a 530 nm y calcule la Contenido de sal de aspirina y arginina. El contenido de sal de aspirina y arginina = (valor de medición real/valor de pesaje) × loo, sustituya los datos para obtener el contenido de sal de aspirina y arginina.
3. Análisis de fármacos in vivo de aspirina:
3.1 Determinación de la concentración plasmática de aspirina mediante cromatografía de ondas de alta resolución en fase reversa
1 Instrumentos y reactivos: Cromatógrafo en fase líquida de alto rendimiento Waters 2690, equipado con un detector de matriz de 996 diodos y un sistema de procesamiento de datos Millennium (Fábrica de instrumentos Shanghai Qingpu Huxi, centrífuga de alta velocidad TGL-16) (Fábrica de equipos médicos de Shanghai); Sustancias de referencia de ácido salicílico y ácido benzoico (Instituto Chino para el Control de Productos Farmacéuticos y Biológicos) es de grado analítico, el éter es de grado cromatográfico; el agua es agua ultrapura;
Condiciones cromatográficas: la columna cromatográfica es una columna Diamonsil C18 (4,6 mm × 250 mm, 5 um), la fase móvil es metanol, etil ojo-0,2 ácido fosfórico (18:32:50), la longitud de onda de detección es de 237 nm y el caudal es de 1,0 ml/min.
Preparación de la solución. Preparación de la solución: Pesar con precisión 10,10 mg de la sustancia de referencia de ácido salicílico, agregar levadura metílico para disolverla, concentrar a 10 ml para obtener una solución madre de ácido salicílico de 1,010 mg/L y diluirla con metanol en una serie de soluciones con diferentes concentraciones. Pesar con precisión 10,44 mg de ácido benzoico, disolverlo en metanol y ajustar el volumen a 10 ml para obtener una solución madre de ácido benzoico de 1,044 mg/L. Tome 1 ml de la solución de reserva y dilúyalo a 1 ml con metanol para obtener una solución de trabajo estándar interna de 104,4 ug/ml.
Procesamiento y determinación de la muestra: tomar 0,5 nl de muestra de suero, agregar 50 ul de solución estándar interna de ácido benzoico (104,4 ug/m1), 2 ml de éter dietílico, agitar durante 2 minutos, centrifugar a 15000 r/min durante 5 minutos. , tomar 20 ul de sobrenadante, inyectar la muestra en las condiciones cromatográficas anteriores y registrar los cromatogramas y las áreas de los picos del estándar interno y la muestra respectivamente. Registre los cromatogramas y las áreas de los picos del estándar interno y la muestra respectivamente, y calcule el área del pico de acuerdo con el método del estándar externo.
Discusión
Existen muchos métodos para analizar la aspirina y sus preparados, pero todos tienen una cosa en común. Para el análisis HPLC, la columna de detección generalmente utiliza una columna C18 y la longitud de onda de detección es de alrededor de 280. El método de titulación se basa en la acidez del ácido carboxílico libre contenido en el fármaco, o en la titulación inversa con ácido después de la hidrólisis. Otras mediciones, como las realizadas mediante modelos matemáticos, también se basaron en la estructura química y las propiedades de la aspirina.
Referencias:
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