¿Cómo se mide el número total de bacterias y colonias en los alimentos?

El método de determinación del número total de bacterias y número total de colonias en los alimentos es el siguiente:

Método de recuento de cultivo en placa

Principio del método experimental

El número total de colonias se refiere al número total de colonias bacterianas contenidas en 1 g o 1 ml de muestra obtenida después de que los alimentos se procesen y cultiven en determinadas condiciones. El número total de colonias bacterianas se utiliza principalmente como marcador para determinar el grado de contaminación de los alimentos. Este método también se puede utilizar para observar la dinámica de la reproducción bacteriana en los alimentos, a fin de proporcionar una base para la evaluación higiénica de las muestras inspeccionadas. . El número total de colonias no representa el número total de bacterias realmente presentes en la muestra. El número total de colonias no puede distinguir los tipos de bacterias, por lo que a veces se le llama número de bacterias diversas, número de bacterias aeróbicas, etc. Materiales experimentales

Muestras de prueba de alimentos en medio agar

Reactivos, kits

¿Solución salina de hidróxido de sodio con etanol?

Instrumentos, consumibles

Incubadora eléctrica a temperatura constante, refrigerador, baño María a temperatura constante, bandeja, balanza, estufa eléctrica, pajita, frasco, matraz Erlenmeyer, cuentas de vidrio, platos planos, tubos de ensayo, gradilla para tubos de ensayo, lámpara de alcohol, homogeneizador, mortero, cuchillo esterilizador, tijeras, pinzas esterilizadas, alcohol, bolitas de algodón, vidrio, crayones, libro de registro

Pasos experimentales

Procedimientos de inspección

Ver Figura 5-. 1 para el procedimiento de prueba de recuento bacteriano total

II. Dilución y cultivo de la muestra

1. Utilizando una operación aséptica, agregue 25 g (o 25 ml) de la muestra. Después de cortarla en trozos, colóquelo en un frasco de vidrio esterilizado que contenga 225 ml de solución salina fisiológica estéril u otro diluyente (se coloca previamente un número adecuado de perlas de vidrio en el frasco) o en un mortero esterilizado, y agítelo o tritúrelo bien para obtener 1: Dilución uniforme de 10. Después de agregar el diluyente a la muestra sólida, lo mejor es colocarlo en un homogeneizador esterilizado y procesarlo durante 1 minuto a una velocidad de 8 000 r/min-10 000 r/ml para obtener una dilución uniforme de 1:10.

2. Utilice una pajita estéril de 1 ml para absorber 1 ml de la dilución 1:10 e inyéctela lentamente a lo largo del tubo en un tubo de ensayo que contenga 9 ml de solución salina estéril u otros diluyentes (tenga en cuenta que el La punta de la pipeta no toca el diluyente en el tubo, lo mismo a continuación), agite el tubo de ensayo y mezcle uniformemente para hacer una dilución de 1:100.

3. Tome otra pajita estéril de 1 ml y realice una dilución incremental de 10 veces según la secuencia de operación anterior. Para cada dilución incremental, utilice una pajita estéril de 1 ml.

4. De acuerdo con los requisitos de las normas de higiene alimentaria o la estimación de la contaminación de la muestra de prueba, seleccione 2-3 diluciones apropiadas y realice diluciones incrementales de 10 veces, es decir, absorba la dilución de la dilución. Pipetee 1 ml de dilución en una placa esterilizada y haga dos placas para cada dilución.

5. Después de colocar el diluyente en la placa, el medio de agar nutritivo debe enfriarse a 46 °C a tiempo [se puede colocar en un baño de agua (45 ± 1) °C para mantenerlo caliente. e inyectar de 15 ml a 20 ml en la placa, girar la placa para mezclar uniformemente y, al mismo tiempo, verter el medio de cultivo agar nutritivo en una placa esterilizada con 1 ml de diluyente (sin muestra) como control en blanco.

6. Después de que el agar se solidifique, dé la vuelta a la placa y colóquela en una incubadora a (36 ± 1) °C para la incubación (48 ± 2) h. y multiplíquelo por el factor de dilución para obtener I g (1 ml) El número total de colonias contenidas en la muestra.

3. Método de cálculo de colonias

1. Selección del recuento de colonias en placa

Seleccione una placa con un recuento de colonias entre 30 y 300 como estándar para determinar el número total de colonias. Utilice dos placas para una dilución y promedie los dos promedios. Cuando en una de las placas crecen colonias más grandes en forma de escamas. No se debe utilizar, pero se debe utilizar el recuento en placa sin crecimiento de colonias como número de colonias en esta dilución. Si las colonias en forma de placa son menos de la mitad de la placa y las colonias de la mitad restante están distribuidas uniformemente 2 fB, puede calcular la mitad de la placa y multiplicarla por 2 U para representar el número de colonias en toda la placa. .

2. ?Selección de dilución

(1) Se debe seleccionar una dilución con un número promedio de colonias entre 30 y 300, multiplicarla por el factor de dilución y reportarla (ver tabla). 5-2 Ejemplo 1).

(2) Si hay dos diluciones y el número de colonias cultivadas está entre 30 y 300, la decisión se basará en la proporción de las dos. Si la proporción es pequeña, se debe informar el número promedio; si la proporción es mayor que 2, se debe informar el número menor (consulte la Tabla 5-2, Ejemplo 2 y Ejemplo 3).

(3) Si el número promedio de colonias en todas las diluciones es mayor que 300, el informe debe reportarse como el número promedio de colonias en la dilución más alta multiplicado por el factor de dilución (consulte la Tabla 5-2 Ejemplo 4).

(4) Si el número promedio de colonias en todas las diluciones es inferior a 30, se debe informar como el número promedio de colonias en la dilución más baja multiplicado por el factor de dilución (consulte la Tabla 5-2 Ejemplo 5).

(5) Si no hay crecimiento de colonias en todas las diluciones, infórmelo como menos de 1 multiplicado por la proporción de dilución más baja [consulte la Tabla 5-2 Ejemplo 6].

(6) Si el número promedio de colonias en todas las diluciones no está entre 30 y 300, y algunas de ellas son mayores que 300 o menos de 30, el número promedio de colonias cerca de 30 o 300 será reportado multiplicado por el factor de dilución (Ver Tabla 5-2 Ejemplo 7).

3. ?Reporte del número de colonias

Si el número de colonias es menor a 100, reportarlo como número real; cuando sea mayor a 100, utilice dos cifras significativas, y el número que sigue a las dos cifras significativas Números, calculados por redondeo. Para acortar el número de ceros después del número, se puede representar mediante un exponente de 10; consulte la columna "Método de informe" en la Tabla 5-2.

Notas

1. El método de recuento de cultivo en placa solo puede detectar bacterias en crecimiento viables, pero no puede detectar el número total de bacterias en la muestra. Siempre es mayor que el número real de. Bacterias que viven en los alimentos. La cantidad de bacterias es menor porque hay muchos tipos de bacterias en los alimentos y sus características de vida son diferentes y es imposible que todas crezcan en condiciones de cultivo uniformes. Sin embargo, todavía se puede utilizar para evaluar el grado de contaminación bacteriana de todo el alimento, por lo que actualmente este método se utiliza habitualmente en inspecciones generales de higiene alimentaria.

2. El recuento de colonias en placa se utiliza para medir el número total de colonias en los alimentos. Generalmente se utiliza el cultivo a temperatura media, especialmente para los alimentos manufacturados que son directamente para el consumo, porque los requisitos de higiene de estos alimentos son diferentes. para evitar estrictamente que el tracto digestivo ingrese a los alimentos contaminados por bacterias patógenas de enfermedades infecciosas y patógenos de intoxicación alimentaria. Estas bacterias patógenas son todas bacterias mesófilas, por lo que es más razonable utilizar un cultivo a temperatura media al medir la cantidad de bacterias. .