¿Qué significa "alto rendimiento" en la tecnología de secuenciación de alto rendimiento?
El alto rendimiento es relativo a la tecnología de secuenciación de primera generación. La tecnología de secuenciación de primera generación solo puede secuenciar un fragmento de una muestra a la vez y la cantidad de datos generados es relativamente pequeña, mientras que la tecnología de secuenciación de Qualcomm. La tecnología de secuenciación masiva puede generar decenas o cientos de GB de datos a la vez y puede secuenciar una gran cantidad de muestras simultáneamente.
En la década de 2000, la secuenciación realizada en instrumentos como el 3700 y MegaBace también se consideraba secuenciación de alto rendimiento, a diferencia de la secuenciación manual o los geles en bloque.
Pero después de 2005, la secuenciación de alto rendimiento pasó a denominarse secuenciación de próxima generación. El rendimiento de la secuenciación de segunda generación, como 454, Solexa (luego cambiada a Illumina) y SOLiD, fue mayor que el de la primera generación. secuenciación como 3730. decenas de miles o incluso cientos de millones de veces, por lo que se denomina secuenciación de alto rendimiento. Información ampliada
Principio:
Este protocolo de secuenciación se basa en el método de secuenciación didesoxi (Sanger et al., 1977). Para realizar la secuenciación de extremos emparejados de cada inserto clonado, se deben proporcionar dos placas de reacción de secuenciación de ciclo de 384 pocillos por placa de ADN plantilla de plásmido. Las reacciones de secuenciación se realizaron utilizando la versión química 3.1 de Big Dye Terminator (AppliedBiosystems) y el estándar M13 o cebadores directos e inversos de uso común. Las reacciones de secuenciación se configuraron mediante una estación de trabajo de pipeteo BiomekFX (Beckman).
El brazo robótico es responsable de dividir en alícuotas la muestra plantilla y actuar como agitador para la solución de reacción, que contiene didesoxinucleótidos, nucleótidos marcados fluorescentemente, TaqDNA polimerasa, cebadores de secuencia y tampones. Las plantillas y las placas de reacción tienen códigos de barras y se rastrean mediante un lector de códigos de barras en la estación de trabajo de pipeteo BiomekFX para garantizar una transferencia sin errores de plantillas y soluciones de reacción.
Enciclopedia Baidu: secuenciación de alto rendimiento del genoma