Estudio sobre la mejora del método de determinación de lactonas terpenoides en pastillas que caen las hojas de Ginkgo Pastillas que caen las hojas de Ginkgo

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Medicamentos tradicionales y herbarios chinos Volumen 42 Número 12 de diciembre de 2011

Determinación de lactonas terpenoides en pastillas que dejan caer hojas de Ginkgo Investigación sobre la mejora del método

Huang Qinwei, Li Yinghong, Zheng Cheng*

Instituto de Inspección de Alimentos y Medicamentos de Zhejiang, Hangzhou 310004, Zhejiang

Resumen: Propósito: Controlar la extracción de las hojas de Ginkgo. Se utilizaron sustancias como controles para establecer un método de determinación cuantitativa de lactonas terpenoides en pastillas de Ginkgo biloba. El método adopta el método HPLC-ELSD, cromatografía, la fase móvil es metanol-agua (30:70), el caudal volumétrico es 0,8 ml/min, el detector ELSD y la columna de deriva es una columna Diamonsil C18 (150 mm × 4,6 mm, 5 μm)

La temperatura del tubo es de 105 °C y el caudal volumétrico de nitrógeno es de 3,0 l/min. Resultados Ginkgolide A, Ginkgolide B, Ginkgolide C y bilobalida mostraron una buena linealidad logarítmica en 1 672,2 a 10 033,2, 1 026,4 a 6 158,4, 527,8 a 3 166,8 y 2 200,8 a 13 204,8 ng respectivamente; La ginkgólida A, la ginkgólida B, la ginkgólida C, la bilobálida y las lactonas terpénicas totales fueron 100,3 (RSD 2,5), 108,1 (RSD 3,5), 116,0 (RSD 4,9), respectivamente. Conclusión Este método es simple, fácil de implementar, altamente controlable y reproducible. Puede usarse para la determinación cuantitativa de lactonas terpenoides en Ginkgo Ye Dropping Pills y proporciona una idea y una solución efectiva para la determinación simultánea de componentes de múltiples índices. Medicamentos de patente china.

Palabras clave: pastillas para eliminar hojas de ginkgo; lactonas terpénicas; extracto de hoja de ginkgo; Ginkgolide B; Ginkgolide C; número de CLC: R286. )12 - 2456 - 03

Mejora del ensayo de lactonas terpénicas en Yinxingye Dropping Pill

HUANG Qin-wei, LI Ying-hong, ZHENG Cheng

Zhejiang Instituto para el Control de Alimentos y Medicamentos, Hangzhou 310004, China

Palabras clave: Yinxingye Dropping Pill; lactonas terpénicas; extracto de hojas de gingkolida A; ginkgólida C; Las pastillas que caen las hojas son una nueva preparación de extracto de hoja de ginkgo. Tienen el efecto de activar la circulación sanguínea, eliminar la estasis sanguínea y dragar las colaterales. Se utilizan para el dolor de pecho, los accidentes cerebrovasculares y la hemiplejía causada por la estasis sanguínea y la obstrucción de las colaterales. lengua fuerte, dificultad para hablar, angina de pecho estable debido a una enfermedad coronaria e infarto cerebral con los síntomas anteriores [1]. Actualmente, las pastillas para dejar caer las hojas de Ginkgo son producidas exclusivamente por Zhejiang Wanbang Pharmaceutical Co., Ltd., y los estándares están incluidos en la edición de 2010 de la Farmacopea China [2]. La lactona terpenoide es uno de los componentes activos del extracto de hoja de Ginkgo [3]. Las lactonas terpénicas de ginkgo pueden antagonizar de forma muy selectiva la agregación plaquetaria inducida por PAF, entre las cuales la ginkgolida B tiene el efecto más fuerte, reduciendo así la viscosidad de la sangre y previniendo la isquemia y la hipoxia en los tejidos y órganos del cuerpo [4].

Las lactonas terpenoides de ginkgo se utilizan habitualmente como controles para establecer métodos de determinación cuantitativa HPLC-ELSD [2, 5-7], y utilizan estas cuatro sustancias de referencia para medir el total. Para simplificar la operación y ahorrar recursos, este experimento utilizó el extracto de control de hoja de ginkgo como control para realizar una investigación metodológica y optimizar el estándar original. 1 Instrumentos y materiales

Cromatógrafo líquido de alto rendimiento Agilent serie 1200 (Agilent Company de Estados Unidos): incluye bomba cuaternaria G1311A, desgasificador G1322A

Fecha de recepción: 2011-07-12

Proyecto de financiación: Plan Nacional de Apoyo a la Ciencia y la Tecnología “Undécimo Plan Quinquenal” (2009ZX09308-004)

Sobre la autora: Huang Qinwei (1983—), mujer, de Wenzhou , Zhejiang, maestría, especialidad Dedicado al análisis de calidad farmacéutica.

Tel: [1**********] Fax: (0571)86459425 Correo electrónico: qingwei-h@163.com

*Autor para correspondencia Zheng Tel: (0571)86459414 E-mail: joeff30@163.com

Máquina, muestreador automático G1329A, horno de columna G1316A, detector de dispersión de luz evaporativa Alltech 2000ES.

Bilobalide (BB, número de lote 110965-200404), Ginkgolide A (GA, número de lote 110862-200608), Ginkgolide B (GB, número de lote 110863-200508), Ginkgolide C (GC, número de lote 110864 -200906) las sustancias de referencia fueron proporcionadas por el Instituto Chino para el Control de Productos Farmacéuticos y Biológicos; el extracto de control de hoja de Ginkgo (número de lote 091004) fue proporcionado por Zhejiang Conba Pharmaceutical Co., Ltd. (estandarizado, que contiene GA 26,78 mg/g, GB 16,44 mg/g, GC 8,45 mg/g, BB 35,25 mg/g). El acetato de etilo, el acetato de sodio y el ácido clorhídrico son todos de calidad analítica; el metanol es de calidad cromatográfica y el agua es agua bidestilada. Las pastillas que gotean de hojas de ginkgo (números de lote 100310, 100311, 100312, 100209, 100401, 100402) son proporcionadas por Zhejiang Wanbang Pharmaceutical Co., Ltd. 2 Métodos y resultados 2.1 Condiciones cromatográficas

La columna cromatográfica es una columna Diamonsil C18 (150 mm×4,6 mm, 5 μm), la fase móvil es metanol-agua (30:70) y el flujo volumétrico tasa

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0,8 ml/min, detector ELSD, temperatura del tubo de deriva 105 ℃, El caudal volumétrico de nitrógeno es de 3,0 l/min. El número de platos teóricos se calcula en base al pico BB

1

1

no menos de 2 500 la separación entre el pico GA y el pico GB es mayor; que 1,5. El cromatograma se muestra en la Figura 1.

A B

1

3

2

4

3 p>

2

4

C

3

2

4

t/min

1-BB 2-GC 3-GA 4-GB

0 10 20 30 0 10 20 30 0 10 20 30

Fig. 1 Cromatogramas de HPLC del control de extracto de hojas de ginkgo (A), la píldora de goteo Yinxingye (B) y la sustancia de referencia mixta (C),

y la sustancia de referencia mixta (C)

2.2 Preparación de una solución de sustancia de referencia mixta

527,8～3 166,8, 2 200,8～13 204,8 ng mostraron una buena relación lineal de contraste. 2.6 Inspección de precisión

Pipetee con precisión 10 μL de la solución de extracto de control anterior, repita la inyección 5 veces y registre las áreas de los picos. Las RSD de las áreas de los picos de GA, GB, GC y BB son 0,2. , 0,4, 0,5, respectivamente 0,1, lo que indica una buena precisión del instrumento. 2.7 Prueba de estabilidad

Tome la muestra número de lote 100310 para preparar la solución de prueba, inyéctela en el cromatógrafo a las 0, 4, 10, 16, 24 y 30 horas respectivamente y registre las áreas de los picos de GA. , GB, GC y BB, los resultados mostraron que las RSD de las áreas de los picos de GA, GB, GC y BB fueron 0,5, 1,2, 0,7 y 0,2 respectivamente, lo que indica que la solución de prueba se mantuvo estable dentro de las 30 h. 2.8 Prueba de reproducibilidad

Tome aproximadamente 0,5 g de la muestra del lote número 100310, 6 copias, opere según el método de preparación de la solución de prueba, inyéctela en el cromatógrafo líquido y mida de acuerdo con la ley. lactonas terpenoides totales La RSD de cantidad es 2,3 y la RSD de GA, GB, GC y BB son 2,4, 3,0, 2,8 y 1,5 respectivamente. 2.9 Prueba de tasa de recuperación de muestras

De acuerdo con el método de preparación de la solución de prueba, tome aproximadamente 0,25 g de cada uno del mismo lote de muestras (número de lote 100310), ***6 partes, y agregue el control de hoja de Ginkgo estandarizado. extracto Se inyectaron aproximadamente 0,1 g de cada uno en el cromatógrafo líquido, se midieron según la ley y se calcularon la tasa de recuperación y la RSD. Los resultados muestran que las tasas de recuperación promedio de GA, GB, GC, BB y lactonas terpenoides son 100,3, 108,1, 116,0, 90,4, 99,3 respectivamente, y las RSD son 2,5, 3,5, 4,9, 0,6, 1,1 respectivamente. los requisitos. 2.10 Determinación de muestras

Tome aproximadamente 0,5 g de cada uno de los 6 lotes de muestras, opere según el método de preparación de la solución de prueba, inyecte en el cromatógrafo líquido y mida de acuerdo con la ley; consulte "Medicina china".

Separar Precisión Pesar 22,47, 18,97, 10,25 y 19,60 mg de sustancias de referencia GA, GB, GC y BB, colocarlas en un matraz volumétrico de 20 mL, agregar metanol para disolver y diluir hasta la marca. y agite bien para obtener una solución mixta de sustancia de referencia.

2.3 Preparación de la solución de prueba

Tomar 20 pastillas de gotas de hojas de ginkgo, triturarlas finamente, mezclar bien, tomar 0,5 g, pesarlo con precisión, colocarlo en un matraz cónico con tapa, agregar 20 mL de agua y 2 clorhídricos. ácido Añadir 4 gotas de la solución y 20 ml de acetato de etilo y calentar a reflujo durante 30 minutos; enfriar a temperatura ambiente, transferir a un embudo de decantación, separar la solución de acetato de etilo y extraer la solución acuosa con acetato de etilo tres veces. 20 ml cada vez y combinar el ácido acético. Extraer el líquido de acetato de etilo con 20 ml de solución de acetato de sodio. Separar el líquido de acetato de sodio y extraer con 20 ml de acetato de etilo. Combinar el líquido de acetato de etilo y lavarlo dos veces con agua. 10 ml cada vez. Separar el agua líquida y utilizarla con acetato de etilo. Extraer 20 ml de éster, combinar el acetato de etilo líquido, evaporar hasta sequedad, disolver el residuo con metanol y transferir a un matraz medidor de 5 ml, agregar metanol al. marcar, agitar bien y obtener el resultado.

2.4 Preparación de la solución del extracto de control

Tomar 0,15 g del extracto de control de hoja de Ginkgo estandarizado, pesarlo con precisión y prepararlo según el método de preparación de la solución de prueba. solución de extracto.

2.5 Investigación de la relación lineal

Pipetee con precisión 2, 4, 6, 8, 10 y 12 μL de la solución de extracto de control anterior e inyéctelos en el líquido de alto rendimiento. cromatógrafo respectivamente, el valor logarítmico de es la abscisa (X), y el valor logarítmico del área del pico es la ordenada (Y) para la regresión lineal, y se obtiene la ecuación de regresión: GA Y = 1,249 X -2,721 5, r =. 0,999 2; GB Y = 1,421 6 X - 4,629 1, r = 0,999 4; GC Y = 1,646 2 p> BB están respectivamente en 1 672,2～10 033,2, 1 026,4～6 158,4,

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[1] La cantidad de lactonas terpenoides se calcula en función de la cantidad total de GA, GB, GC y BB.

Se observaron la temperatura del tubo de deriva y el caudal volumétrico de nitrógeno, y los resultados mostraron que la deriva. Cuando la temperatura del tubo es de 105 °C y el caudal volumétrico de nitrógeno es de 3,0 L/min, el valor de respuesta es el más grande.

Este experimento también utilizó el método convencional de sustancias de referencia mixtas para determinar la cantidad de lactonas terpenoides totales en 6 lotes de muestras. Después de la comparación, las desviaciones promedio relativas de los resultados obtenidos por los dos métodos de determinación fueron 0,9. 0,8 y 0,4, 1,3, 0,0, 1,2.

Para hacer el estándar más científico y sencillo, los resultados de este experimento con lactonas terpenoides se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1 Resultados de la determinación cuantitativa de terpenolactonas totales en Ginkgo Ye Dropping Pills (n = 2)

Tabla 1 Determinación de terpenolactonas

en Yinxingye Dropping Pill (n = 2)

Número de lote

Lactonas terpenoides totales/(mg·pastilla?1)

Método de extracto de control de hoja de ginkgo

Método de referencia mixto

100310 1,11 1,09 100311 1,17 1,19 100312 1,23 1,24 100209 1,20 1,17 100401 1,20 1,20

100402 1,25

>

3 Discusión

Refiriéndose a la edición de 2010 de la "Farmacopea China" [1] "Agregue 10 ml de agua y caliente para disolver", se descubrió que algunos residuos no se podían disolver por completo, por lo que este experimento examinó el De acuerdo con las condiciones de extracción de la solución del producto, los resultados muestran que 20 ml,..., agregar 20 ml de acetato de etilo y calentar y refluir durante 30 minutos "puede resolver el problema del residuo insoluble, y al mismo Se puede evitar aumentar la dosis de acetato de etilo a 20 ml cada vez.

Este experimento comparó n-propanol-tetrahidrofurano-agua

[4-6]

y metanol-

Agua [8-9] dos sistemas de fase móvil Después de las pruebas, se descubrió que los cuatro tipos de ginkgólidos en ambos sistemas pueden lograr una separación inicial en 30 minutos. -propanol y tetrahidrofurano son reactivos poco comunes, especialmente el tetrahidrofurano es altamente tóxico e irritante. Teniendo en cuenta lo anterior, la fase móvil se configuró en metanol-agua (30:70). Este experimento se realizó a temperaturas de columna de. 25, 30 y 40 °C. El efecto de separación de los picos cromatográficos se examinó en las condiciones y los resultados mostraron que cada pico cromatográfico se podía separar eficazmente en columna cromatográfica Diamonsil C18 (150 mm x 4,6 mm, 5 μm). También se examinaron la columna cromatográfica Agilent Eclipse XDB-C18 (150 mm x 4,6 mm, 5 µm), la columna Kromasil 100-5 C18 250 mm x 4,6 mm, 5 µm. Los resultados muestran que las tres columnas son adecuadas para esto. método de análisis, lo que indica que este método tiene buena durabilidad.

En este experimento, se optimizaron los parámetros del detector de dispersión de luz evaporativa, teniendo en cuenta

el método de pretratamiento y la cromatografía líquida. se mejoró el sistema de fase móvil; para ahorrar la cantidad de sustancias de referencia y reactivos químicos, se utilizó la extracción de control de hojas de Ginkgo. La cuantificación de sustancias proporciona ideas y soluciones efectivas para la determinación simultánea de múltiples indicadores en medicamentos patentados chinos. para ahorrar materiales de referencia de medicina china y reducir

los costos de inspección reales.

Referencias

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actividad de los conjugados de ácido ginkgólico del Ginkgo biloba indio [J]. Psicofarmacología, 1998, 136(2): 148-152 [5] Yan Yuzhen, Xie Peishan. Determinación de conjugados de ácido ginkgólico en hojas de Ginkgo mediante HPLC. Método ELSD 4 tipos

Contenido de lactona terpenoide [J]. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2001, 21(3): 173-176.

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“ Agregue agua (