¿Se puede centrifugar el estado sensorial de la levadura después de la preparación?
La levadura en estado competente se puede centrifugar después de la preparación. Los instrumentos necesarios para la preparación en estado competente: baño de agua (VWR), centrífuga (Eppendorf), agitador a 30 °C con incubadora de temperatura constante (VWR) y petri. platos .
Preparación de células receptoras de levadura
(1) Recoja Saccharomyces cerevisiae EBY100 monoclonal fresco de la placa YPD, agréguelo a 10 ml de medio líquido YPD e incúbelo a 30 °C. cultivo durante la noche a 250 rpm;
(2) Determine que el valor OD600 del cultivo nocturno esté entre 3,0 y 5,0;
(3) Agregue 10 ml de YPD durante la noche Diluya el cultivo hasta un valor de OD600 de 0,2 a 0,4;
(4) Continuar cultivando en un agitador a 28-30°C durante 3-6 horas, de modo que el valor de OD600 del cultivo alcance de 0,6 a 1,0;
(4) p>
(5) Recoger las células de levadura mediante centrifugación a 1500g durante 5 minutos a temperatura ambiente y desechar el sobrenadante.
(6) Lavar la levadura; células con 10 ml de solución de lavado, luego centrifugar a 1500 g durante 5 minutos a temperatura ambiente para recoger las células. Deseche el sobrenadante;
(7) Resuspender las células de levadura en 1 ml de TE/LiAc y alícuota 50. µl en cada tubo.
Almacenamiento de células receptoras de levadura
Es mejor utilizar células receptoras frescas para cada transformación, porque el almacenamiento a largo plazo reducirá la eficiencia de la transformación. Las células receptoras pueden almacenarse a -80 grados centígrados durante hasta un año sin perder su potencial de transformación. Sin embargo, no se recomienda la congelación instantánea en nitrógeno líquido o en un refrigerador a -80°C. Las células receptoras deben congelarse lentamente en un crioprotector, al igual que las células de los mamíferos.
1. Utilice cajas de cartón o poliestireno expandido para su almacenamiento.
2. Utiliza trozos de papel para dividir los tubos de células de la caja en pequeñas rejillas.
3. Durante el proceso de recuperación, las células se descongelan a 37°C y se lavan con anticongelante utilizando un medio enriquecido antes de la transformación.