El papel de los cebadores en la PCR

Un cebador es un fragmento corto de ARN o ADN monocatenario que puede combinarse con una región complementaria de la cadena de ácido nucleico. Su función es servir como punto de partida para la polimerización de nucleótidos. puede ser Su extremo 3 'comienza a sintetizar una nueva cadena de ácido nucleico. Los cebadores diseñados artificialmente in vitro se utilizan ampliamente en la reacción en cadena de la polimerasa, la secuenciación y la síntesis de sondas.

La PCR utiliza el ADN para desnaturalizarlo en una sola cadena a una temperatura alta de 95 °C in vitro. A baja temperatura (generalmente alrededor de 60 °C), los cebadores se combinan con la cadena simple según el principio. del apareamiento de bases complementarias, y luego se ajusta. Cuando la temperatura alcanza la temperatura de reacción óptima de la ADN polimerasa (alrededor de 72 °C), la ADN polimerasa sintetiza hebras complementarias en la dirección del fosfato al azúcar de cinco carbonos (5'-3').

Información ampliada

Hay muchas formas de diseñar cebadores, que vienen determinados por el propósito de la PCR en el experimento, pero los principios básicos son los mismos. Hay dos fuentes principales de enzimas utilizadas en la PCR: Taq y Pfu, que provienen de dos bacterias termófilas diferentes. Entre ellos, la eficiencia de amplificación de Taq es alta, pero es probable que se produzcan discrepancias. La eficiencia de amplificación de Pfu es débil pero tiene función de corrección de errores. Por lo tanto, se deben tomar diferentes decisiones según las necesidades reales.

La plantilla, el ADN utilizado para la amplificación, puede ser de cualquier fuente, pero hay dos principios: primero, la pureza debe ser alta y, segundo, la concentración no puede ser demasiado alta para evitar la inhibición.

Enciclopedia Baidu-Reacción en cadena de la polimerasa